[发明专利]肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法

说明书

本发明公开了一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，包括以下步骤：对供试品进行处理，得到目标样A；对酶标板进行包被以及封闭处理；将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理的酶标板中，得到供试品测试样和目标样A测试样；供试品测试样和目标样A测试样中均加入特异性抗血清，得到供试品反应样和目标样A反应样；向供试品反应样和目标样A反应样中分别加入酶标抗体，然后加入底物液进行显色反应，并测出OD值；以及根据供试品反应样和目标样A反应样中得到的OD值计算出对应的多糖含量，从而计算出吸附率，本发明具有计算出疫苗中各个血清型的结合原液的吸附率，并通过吸附率得出各型结合原液免疫原性的优点。

技术领域

本发明是关于利用各型多糖与载体蛋白通过化学方式结合形成多糖蛋白结合物，然后通过包被蛋白抗体将多糖蛋白结合物吸附到固相载体上，再通过各型特异性抗体血清与各型多糖反应测定吸附率方法，特别是关于一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法。

背景技术

抗原经佐剂吸附后，在佐剂表面和内部高度聚集，该过程不仅不改变抗原的物理和化学特性，还可将抗原物理型地呈递给免疫细胞，促进免疫细胞充分、高水平、长时间地与抗原接触，诱导免疫应答，该过程被称为“储存库效应”。但佐剂的吸附能力与其对抗原的吸附率密切相关，吸附能力越强，对抗原的吸附率越高。而佐剂对抗原的吸附率又与疫苗的免疫效果密切相关，抗原与佐剂的吸附率越高，免疫效果越好；反之免疫效果越差。因此，只有保证佐剂吸附能力强，才能实现对抗原的高吸附率并最终保证疫苗具备良好的免疫效果。

现有的测定疫苗吸附率的方法，仅仅是测量肺炎球菌多糖结合疫苗总的吸附率，无法测量肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液的每个血清型各自的吸附率。

因此，需要一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，来解决上述问题

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其能够分别测得肺炎球菌多糖结合疫苗中各型结合原液的吸附率。

为实现上述目的，本发明的实施例提供了一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

对供试品进行处理，得到目标样A；

对酶标板进行包被以及封闭处理；

将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理的酶标板中，得到供试品测试样和目标样A测试样；

供试品测试样和目标样A测试样中均加入特异性抗血清，得到供试品反应样和目标样A反应样；

向供试品反应样和目标样A反应样中分别加入酶标抗体，孵育，然后加入底物液进行显色反应，并测出OD值；

根据供试品反应样和目标样A反应样中得到的OD值计算出对应的多糖含量，并根据供试品反应样和目标样A反应样的多糖含量计算出吸附率。

在本发明的一个或多个实施方式中，对所述供试品进行离心处理，离心后的上层清液，即为目标样A。

在本发明的一个或多个实施方式中，所述供试品进行离心处理的条件包括：相对离心率为(5000～6500)×g、温度为4～6℃以及持续时间为5～10min。

在本发明的一个或多个实施方式中，对所述酶标板的包被过程包括：将被包被液稀释过的破伤风抗毒素加入至酶标板中，然后在2～8℃的条件下包被16～18h，再使用洗涤缓冲液洗涤酶标板1～2次。