[发明专利]一种测定金银花中多种酚酸类成分含量的方法

说明书

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种测定金银花中多种酚酸类成分含量的方法。本发明采用HPLC‑QQQ‑MS进行测定；色谱柱为Hola C18色谱柱，以0.08％甲酸‑水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.3ml/min，进样量为2μl，柱温为25±0.8℃；电喷雾电离离子源在负离子模式下扫描，辅助气温度为350℃，流速为8L/min，压力为35psig，喷雾电压为3000V，检测模式：MRM^‑；本发明不仅考察其含量较高的绿原酸及异绿原酸A和异绿原酸C，还对其微量酚酸类成分进行定量考察，为金银花资源的有效开发及其酚酸类成分的合理利用提供参考。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种测定金银花中多种酚酸类成分含量的方法。

背景技术

金银花(Lonicerajaponica Flos)为传统中药，其价值高、用途广，常用于疏散风热和清热解毒。金银花的有效活性成分主要包括酚酸、黄酮及挥发油等，其中酚酸类成分因其良好的抗氧化活性、抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等药理活性，近年来受到广泛关注。此外，2020版《中国药典》也提高了对于金银花酚酸类成分的含量要求，因此酚酸类成分作为金银花的主要成分亟待深入研究。

随着近年来天然化合物分离及结构鉴定技术水平迅速提升，在金银花中有越来越多的酚酸类成分被相继发现，虽已有研究者对金银花所含绿原酸等主要酚酸类成分进行了定性定量研究，但针对金银花微量酚酸类成分的定量研究却未见报道。目前针对金银花成分的定量研究多利用液相或高效液相色谱，该方法仅能对金银花中含量较高的成分进行定量研究，不适合微量成分的定量研究；多数研究仅利用液质联用技术对金银花微量成分进行定性研究，对于液质定量金银花成分的文献及发明鲜有报道。针对金银花酚酸类成分的定量研究不应仅限于含量较高的成分，也应综合考虑含量相对较低的酚酸类成分在金银花中的价值，以便于金银花质量的控制及相关标准的制定。

发明内容

针对上述问题，本发明提出了一种测定金银花中多种酚酸类成分含量的方法，不仅考察其含量较高的绿原酸及异绿原酸A和异绿原酸C，还对其微量酚酸类成分进行定量考察，为金银花资源的有效开发及其酚酸类成分的合理利用提供参考。

本发明所述的一种测定金银花中多种酚酸类成分含量的方法，特点在于，采用HPLC-QQQ-MS进行测定；

色谱条件为：色谱柱为Hola C18色谱柱，100mm×2.1mm，2.7μm，以0.08％甲酸-水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.3ml/min，进样量为2μl，柱温为25±0.8℃；

质谱条件为：电喷雾电离离子源(ESI)在负离子模式下扫描，辅助气温度为350℃，流速为8L/min，压力为35psig，喷雾电压为3000V，检测模式：MRM^-；

所述梯度洗脱为0～5min，3～8％B；5～15min，8～15％B；15～30min，15～19％B；30～35min，19～90％B；35～40min，90％～90％。

其具体步骤为：

(1)供试品溶液的制备：将金银花粉碎后过四号药典筛，取药材粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液，密塞，超声处理，过滤，取续滤液即得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取22种金银花酚酸类成分对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并配置为混合对照品溶液，各成分浓度见表，-20℃保存备用；

(3)色谱条件为：色谱柱为Hola C18色谱柱，100mm×2.1mm，2.7μm，以0.08％甲酸-水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.3ml/min，进样量为2μl，柱温为25±0.8℃；