[发明专利]一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法

说明书

本发明涉及兽药残留检测领域，涉及一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，将禽肉、猪肉或禽蛋依次经过乙腈提取，正己烷脱脂，提取液经过HLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干浓缩；在浓缩干后的样品中加入吡啶和乙酸酐，衍生反应后过滤后，滤液采用GC‑MS/MS检测。本发明采用液‑液萃取、固相萃取和凝胶色谱相结合的提取方法所得到的衍生产物的峰型良好，干扰杂质峰少，而且样品衍生产物的响应值高。

技术领域

本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种检测禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的柱前衍生-气相色谱-串联质谱确证分析方法。

背景技术

目前，国内外有关动物性食品中替米考星残留的前处理方法主要有液-液萃取法和固相萃取法，提取试剂有乙腈、卤代烷、酯和醚等有机溶剂等。由于替米考星的分子量较高、极性强，直接利用气相色谱法或气相色谱-质谱法检测是不可行的。因此本发明采用氢溴酸进行水解，减小药物分子量，然后用乙酸酐作为衍生试剂，对替米考星进行衍生化。到目前为止，有关从禽肉、猪肉及禽蛋中提取替米考星残留并与乙酸酐进行衍生化反应，生成替米考星衍生产物是三乙酰-1,2,4-三羟基-3-二甲氨基-1,5-环氧己烷的研究国内外尚未见报道。

国内外关于替米考星残留的检测方法主要有薄层色谱法、微生物测定法、紫外分光光度法、免疫测定法、液相色谱法和液相色谱-串联质谱法等，曾有文献报道利用GC-MS法检测牛肉和猪肉中的红霉素、竹桃霉素、吉他霉素、螺旋霉素和泰乐菌素，方法的检测结果良好、可靠，是一种实用的确证检测方法。而有关应用GC-MS检测动物性食品中替米考星残留以及应用GC-MS/MS检测禽肉、猪肉及禽蛋中的替米考星残留的方法国内外尚未见报道。与上述文献报道的GC-MS相比较，本试验的前处理方法简单，节省试验成本。该方法定性、定量更准确，准确度和灵敏度好，回收率高，重复性好，填补了国内外关于禽肉、猪肉及禽蛋中替米考星残留GC-MS/MS检测方法的空白。

发明内容

为解决从禽肉、猪肉及禽蛋中提取和净化替米考星残留并衍生化的问题。本试验采用液-液萃取、固相萃取和凝胶色谱法来提取禽肉、猪肉及禽蛋中替米考星的残留；用氢溴酸水解与氢化处理样品，乙酸酐进行替米考星的衍生化，替米考星的衍生反应方程式如下：

为了能够应用气相色谱-串联质谱法检测禽肉、猪肉和禽蛋中替米考星的残留，本发明提供了一种柱前衍生-气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。经过方法学参数验证，该方法能够实现准确的定性和定量，且回收率和准确度高，灵敏度好，满足兽药残留检测的要求。

一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，

将禽肉、猪肉或禽蛋依次经过乙腈提取，正己烷脱脂，提取液经过HLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干浓缩；

在浓缩干后的样品中加入吡啶和乙酸酐，衍生反应后过滤，滤液采用GC-MS/MS检测。

进一步的，所述禽肉为鸡肌肉、鹅肌肉或鸭肌肉；所述禽蛋为鸡蛋、鹅蛋或鸭蛋。

进一步的，GC-MS/MS检测的气相色谱条件为：以TG-1MS为毛细管色谱柱；高纯氦气为载气，载气柱流速为1.0mL/min。

进一步的，GC-MS/MS检测的程序升温步骤为：初始温度100℃，保持1min；30℃/min升至220℃，保持1min；30℃/min升至290℃，保持5min。

进一步的，GC-MS/MS检测的质谱条件为：电子轰击离子源；70eV电离能；高纯氩气为碰撞气；离子源温度为280℃；传输线温度为280℃；溶剂延迟时间为5.0min；以全扫描方式定性，选择反应监测方式定量。

进一步的，HLB固相萃取柱净化的步骤为：将提取液匀速全部过柱后，用5％甲醇溶液淋洗1次，去除杂质，待淋洗液全部流出后，抽干1min，然后用甲醇进行洗脱。