[发明专利]一种种植后阶段胚胎体外培养液及其培养方法

说明书

本发明公开了一种种植后阶段胚胎体外培养液及培养方法，该培养液专门用于哺乳动物特别是人类种植后阶段(10‑14天)胚胎体外培养。其中添加了多种营养成分，包括能量代谢基质、氨基酸、L‑谷氨酰胺、ITS‑X、β‑雌二醇、孕酮、抗氧化剂、RevitaCell^TM补充剂、叶酸等，为进一步探索种植后阶段(10‑14天)的胚胎移植策略提供了必要基础条件。发明的目的之二在于提供一种种植后阶段胚胎体外培养的方法，使胚胎在种植后阶段体外培养成为可能，从而拓展了哺乳动物特别是人类种植后阶段胚胎发育的研究范围。

技术领域

本发明涉及辅助生殖技术领域，尤其涉及一种种植后阶段胚胎体外培养液及其培养方法。

背景技术

近年来，随着胚胎工程的不断进步，促进了相关行业的蓬勃发展，如辅助生殖(辅助生殖技术)技术、卵母细胞核移植技术、体外成熟、体外受精、单精注射等技术也得到了不断发展，卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养的研究已取得了很大的成绩。胚胎工程技术中的关键环节是对胚胎进行体外培养，随着体外培养的研究和探讨，通过完善培养液、改良培养系统、生理学家对母体内环境的认识以及机械工程的进步，可以使体外培养环境越来越接近体内环境，解决体外胚胎质量差，卵裂球不够紧凑，抗冻性差，囊胚率不高，妊娠率不高等问题。以附图2为例，人类胚胎从受精后第1天到第14天的发育过程，早期胚胎从1-细胞、2-细胞和8-细胞阶段发育到桑椹胚、囊胚阶段(早期、完整、扩张、孵化囊胚)，基于伦理学原则，人类胚胎体外培养时长不可超过受精后14天，一般情况下，种植后阶段胚胎是指受精后第10-14天胚胎。

目前市面上有众多用于人类种植前阶段(受精后第1-5天)及围种植期前期(受精后第6天)胚胎的培养液。利用现有培养液将胚胎培养至受精后第6天时，可观察到细胞出现轻微的退化现象，提示现有培养液的成分不再适用于受精后第6天的胚胎培养。目前，尚无专门用于哺乳动物特别是人类围种植期(受精后第6-9天)和种植后阶段(受精后第10-14天)胚胎体外培养的培养液。本发明的发明人已经就围种植期(受精后第6-9天)胚胎体外培养液在同一天提交了另一份发明专利申请，在此基础上本发明的发明人继续研制了一种种植后阶段(受精后第10-14天)胚胎体外培养的培养液，这两种胚胎培养液的组成成分不同，因此适合不同时期的胚胎发育，但可以先使用围种植期胚胎体外培养液培养受精后第6-9天，然后使用种植后阶段胚胎体外培养液培养受精后第10-14天。

发明内容

鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种种植后阶段胚胎体外培养液，该培养液专门用于哺乳动物特别是人类种植后阶段(10-14天)胚胎体外培养。其中添加了多种营养成分，包括能量代谢基质、氨基酸、L-谷氨酰胺、ITS-X、β-雌二醇、孕酮、抗氧化剂、RevitaCell^TM补充剂、叶酸等，为进一步探索种植后阶段(10-14天)的胚胎移植策略提供了必要基础条件。发明的目的之二在于提供一种种植后阶段胚胎体外培养的方法，使胚胎在种植后阶段体外培养成为可能，从而拓展了哺乳动物特别是人类种植后阶段移植的研究范围。

一种种植后阶段胚胎体外培养液，包括：

所述的抗氧化剂为N-乙酰基-半胱氨酸、半胱氨酸、维生素E、维生素C、β-巯基乙醇中的至少一种。

进一步的，血清替代物为knock-out血清替代物、人血小板裂解物、人AB血清中的至少一种；所述的knock-out血清替代物购于Thermo Fisher公司(货号10828028)；所述的人血小板裂解物购于Sigma-Aldrich公司(货号SCM151)；所述的人AB血清购于Omegascientific公司(货号HS-20)。

进一步的，基础培养液为Advanced DMEM/F12、DMEM/F12、TCM-199、MEM、Ham′s F-10、RPMI 1640中的至少一种。

进一步的，所述的种植后阶段胚胎体外培养液，还包括RevitaCell^TM，且用量为1-2X。