[发明专利]一种简单安全快速的罗汉果组培外植体入瓶方法

说明书

本发明公开了罗汉果组培外植体入瓶方法，取罗汉果的茎段，表面清洁后浸泡于70％以上的酒精中进行表面消毒，剥取0.5‑2毫米茎尖，接种至培养基中，即完成罗汉果组培外植体入瓶。在消毒处理中，避免使用剧毒化学品升汞，对操作人员和环境都非常安全，操作简单，而且消毒效果好，成株率高，解决了野外采集罗汉果枝条材料的组培入瓶的微生物污染问题。

技术领域

本发明涉及植物组织培养，涉及罗汉果的组织培养方法，具体涉及一种简单安全快速的罗汉果组培外植体入瓶方法。

背景技术

野外采集的罗汉果枝条表面存在大量细菌和真菌等其它微生物，而最难去除的是各种真菌污染，需要在截取茎段后进行消毒处理，才能入瓶。现有罗汉果组培外植体入瓶方法主要有以下问题：

1)升汞(HgCl₂)是剧毒重金属化学品，尽管严格规范操作，使用升汞进行外植体表面消毒处理仍然存在影响身体健康和污染环境的风险。

2)即使采用升汞表面消毒处理，对于那些受到严重环境微生物污染的罗汉果外植体，采用茎段直接入瓶还是很难获得无菌组培苗系。

发明内容

本发明的目的是提供简单安全快速的罗汉果组培外植体入瓶方法，消毒效果好，成株效率高。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种简单安全快速的罗汉果组培外植体入瓶方法，取罗汉果的茎段，表面清洁后浸泡于70％以上的酒精中进行表面消毒0.5-5分钟，剥取0.5-2毫米茎尖，接种至培养基中，即完成罗汉果组培外植体入瓶。

进一步地，所述茎尖长度为0.5-1毫米。

所述的酒精纯度70-75％。

所述茎段为1-3厘米的带节茎段。

所述茎段在酒精中浸泡的时间为0.5-5分钟。

所述培养基中还含有6-BA0.1-1ppm和NAA 0.01-0.1ppm。

进一步地，对于取自污染特别严重的罗汉果藤蔓的茎尖，所述培养基中还包含植物组培抗菌剂(PPM)，其含量为0.1-0.5％，优选为，0.1-0.2％。

所述培养基为MS培养基。

本发明的优点：

1.本发明针对野外采集罗汉果枝条材料的组培入瓶的微生物污染问题，提供上述罗汉果组培外植体入瓶方法，以酒精对罗汉果茎段外植体进行消毒处理，且剥取0.5-2毫米的茎尖转移至培养基中，完成罗汉果组培外植体入瓶。在消毒处理中，避免使用剧毒化学品升汞，对操作人员和环境都非常安全，操作简单，而且消毒效果好，成株率高。

2.本发明针对从严重污染的罗汉果枝条剥取的茎尖，培养基添加PPM1-2ml/L(0.1-0.2％)以后无菌苗成株率提高效果更佳，成株率提高1.5-4倍多。

3.本发明提供的罗汉果组培外植体入瓶方法，茎尖经过培养能够在5-6周后获得罗汉果无菌苗。

具体实施方式

实施例一

1.从野外采集罗汉果藤蔓适当保鲜处理后带回。把藤蔓修剪成1-3厘米带节茎段，自来水冲洗10-30分钟，然后置于70％酒精浸泡2分钟，然后用无菌水冲洗1-2次，用灭菌处理过的滤纸吸去多余水分。在显微镜下剥取1毫米大小茎尖，茎尖数30个，接种到含有6-BA0.1-1ppm和NAA0.01-0.1ppm的MS培养基上进行茎尖培养。