[发明专利]一种提高连翘叶有效成分含量的微生物发酵方法

说明书

本发明公开了一种提高连翘叶有效成分含量的微生物发酵方法，是分别在连翘叶干粉中接种产朊假丝酵母菌和枯草芽孢杆菌，进行分步发酵，利用微生物代谢过程中产生的丰富的酶系降解连翘叶细胞壁，并对非活性物质进行生物转化，以提高连翘叶中有效成分连翘苷和连翘酯苷的含量。采用本发明方法处理后的连翘叶与未发酵连翘叶比较，连翘苷含量提高15%以上，连翘酯苷含量提高20%以上，有效解决了连翘叶中有效成分含量低的问题。

技术领域

本发明属于药物微生物发酵技术领域，涉及一种通过微生物发酵提高连翘叶有效成分含量的方法。

背景技术

连翘为木犀科植物，有清热解毒，消肿散结之功效，是双黄连、银翘散等多种中药复方的重要组分。

连翘传统以果实入药，但同属植物的果实与叶的化学成分却有很好的一致性。而且作为评价连翘药材主要质量指标的有效成分，连翘叶中连翘苷、连翘酯苷的含量也接近于果实。

目前，虽然连翘相关产品的需求急剧增加，但连翘的野生资源开发却不平衡。一方面是连翘果实采青现象时有发生，严重破坏了连翘资源；另一方面，与连翘果实具有化学成分一致性的大量连翘叶却被遗弃不用，造成了资源的巨大浪费。

连翘苷是连翘叶的重要有效成分，对细菌黏附性、细菌代谢及生物膜形态有较强的抑制作用，表现出显著的抗菌活性。连翘苷也可抑制流感病毒关键基因表达，具有较强抗病毒作用。连翘苷还具有较好的降血脂作用，对于预防动脉粥样硬化和冠心病等疾病有一定功效。此外，连翘苷可抑制脂质过氧化，促进抗氧化酶活性，提高机体的抗氧化能力。连翘苷还可抑制促炎症因子的释放，缓解炎症反应，具有解热功效。

连翘酯苷的药理作用也非常广泛，具有良好的应用前景。体内和体外实验表明，连翘酯苷对革兰氏阳性菌和阴性菌均具有很强的抑制活性，具有明显的抗菌活性。连翘酯苷还可诱导干扰素的产生，发挥抗病毒作用。连翘酯苷还是一种有效的天然抗氧化剂，具有很强的清除活性氧能力。连翘酯苷还可显著促进淋巴细胞转化，具有免疫调节作用。

但是，由于连翘叶的成分复杂，导致杂质含量较高。如何能够低成本、快速安全地提高连翘苷和连翘酯苷等有效成分的含量，是目前迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高连翘叶有效成分含量的微生物发酵方法，以解决连翘叶中有效成分含量低的问题，合理开发利用连翘叶资源。

本发明提供的提高连翘叶有效成分含量的微生物发酵方法是先在连翘叶干粉中接种产朊假丝酵母菌进行发酵后，再接种枯草芽孢杆菌进行发酵，利用微生物代谢过程中产生的丰富的酶系降解连翘叶细胞壁，并对非活性物质进行生物转化，以提高连翘叶中有效成分连翘苷和连翘酯苷的含量。

将采用本发明发酵方法处理后的连翘叶与未发酵的连翘叶进行有效成分含量比较，连翘苷和连翘酯苷的含量显著提高。其中，连翘苷的增长率可以达到15%以上，连翘酯苷的增长率可以达到20%以上。

进而，本发明更具体的提高连翘叶有效成分含量的微生物发酵方法是：以连翘叶干粉为原料，先按照每千克连翘叶干粉接种产朊假丝酵母菌 (3～9)×10¹⁰个，于25～40℃有氧发酵48～120h，再按照每千克连翘叶干粉接种枯草芽孢杆菌(2～8)×10¹⁰个，于30～40℃有氧发酵24～96h，制备得到发酵连翘叶。

其中，所述的连翘叶干粉是采摘新鲜的连翘叶，清洗干净后，自然晾干，粉碎过80目筛，灭菌后烘干至含水量6%以下，制备得到的连翘叶干粉。

进一步地，所述新鲜的连翘叶优选采摘5～9月份的连翘叶。

其中，所述的产朊假丝酵母菌是将产朊假丝酵母菌冻干粉接种于含葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母粉1%的YPD培养基中，25～40℃摇床中培养至活菌数为(2～6)×10⁸个/ml。