[发明专利]一种长春花高感柑橘黄龙病模型的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种长春花高感柑橘黄龙病模型的制备方法及其应用。本申请通过叶片的嫁接方式向健康的长春花植株中接种黄龙病病原菌，使用该方法时，通过控制接种叶片的感病级别和控制砧木的生长状态、通过后期的保湿管理使得长春花植株能快速的感染柑橘黄龙病，为批量获得长春花高感柑橘黄龙病模型提供了一个可靠有效的方法；通过比对，该方法相对于传统的膜嫁接方法效率提高了3倍，且植株感病率与现有的嫁接方法感病率相当；同时，还在该模型的基础上以氨苄青霉素作为阳性对照，得出本模型能用于筛选抑制柑橘黄龙病药物的应用，同时，还摸索出了氨苄青霉素的最佳施用条件。

【技术领域】

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种长春花高感柑橘黄龙病模型的制备方法及其应用。

【背景技术】

柑橘黄龙病是柑橘常见的一种细菌性病害，其具有病原细菌无法体外培养、在柑橘植株内潜伏期长、显症慢的特性，为此，柑橘植株本身并不适合用于黄龙病的研究。在现有技术中发现：长春花作为柑橘黄龙病菌的天然寄主，病原菌能在其体内进行快速繁殖，目前也有关于利用长春花制备柑橘黄龙病模式植物的报道，例如，申请号为：201310691324.X，发明名称为《利用长春花筛选抗韧皮部杆菌药物的方法》：该方法也是利用长春花为试材，进行快速筛选药物的方法，但是该方法是通过将菟丝子的吸器与寄主植物维管束相连接，嫁接速度慢而且接种成功率不高；通过大量的文献查阅发现，现有技术中，多数通过使用长春花枝条来进行接种，通过枝条接种其感染率可以得到保障，但是多数需要使用捆绑的方式来完成整个嫁接过程，嫁接效率慢，而且较为繁琐。

在进行柑橘黄龙病的药物筛选过程中，需要大量的模式植物，嫁接方法过于繁琐且复杂的话并不利于高感柑橘黄龙病模式植物的建立，不利于进行大规模的集约化、集群化、规模化的筛选，药物筛选进程进展缓慢，不利于对药物的开发，为此，有必要对接种方法进行改进，发明出一种高效、快速的接种方法，不仅能提高高感植株的嫁接效率，还能进一步提高对抗柑橘黄龙病药物的筛选效率，与此同时在利用高效嫁接感病植株基础上对有报道的有一定抑制作用氨苄青霉素药物进行测试，从而探究出以氨苄青霉素为阳性对照用药的最佳用药方式、用药时间、用药浓度从而较快地筛选获得具有显著抗病能力的小分子药物，为防治柑橘黄龙病提供理论依据，并探索小分子药物防治新途径。

【发明内容】

鉴于上述内容，有必要对接种方法进行改进，发明出一种高效、快速的接种方法，不仅能提高高感植株的嫁接效率，还能进一步提高对抗柑橘黄龙病药物的筛选效率。

为达到上述目的，本发明采用如下方法来实现：

长春花高感柑橘黄龙病模型的制备方法，所述方法为：选取黄龙病感病Ⅲ级的感病长春花植株叶片做为接穗；选取健康的长春花植株做为砧木，对砧木进行去顶处理后，从去顶处垂直向下劈开一个嫁接口，然后将接穗直接插入嫁接口中，通过嫁接夹固定，完成嫁接过程；之后将嫁接好的长春花植株放入薄膜棚中进行保湿，完成模型制备。

其中，感病Ⅲ级的感病长春花植株其判断指标为：植株40-70％叶片呈现黄龙病病症，双枝条或多枝条植株中嫁接枝条全部显症；另外的枝条也有30-50％左右的叶片呈现黄化病症，有些植株伴随有叶片凋落、不再长出新芽或新芽生长缓慢、不能成花或变小变畸形。

进一步的，所述砧木为长到5-9对真叶时的健康长春花植株；所述接穗为黄化面积占比1％-75％的感病长春花叶片。

进一步的，所述砧木为长到5对真叶时的健康长春花植株、接穗为黄化面积占比1％-50％的感病长春花叶片；

或所述砧木为长到7对真叶时的健康长春花植株、接穗为黄化面积占比1％-25％和/或接穗为黄化面积占比51％-75％的感病长春花叶片；

或所述砧木为长到9对真叶时的健康长春花植株、接穗为黄化面积占比1％-75％的感病长春花叶片。

本申请的黄化面积占比计算公式为：(长春花单片叶片黄化面积/长春花叶片总面积)×100％。