[发明专利]一种鸡松果体细胞的分离及原代培养方法有效
| 申请号： | 202110863431.0 | 申请日： | 2021-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN113444681B | 公开（公告）日： | 2022-07-19 |
| 发明（设计）人： | 陈继兰;孙研研;王攀林;李云雷;麻慧;袁经纬 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 苏州言思嘉信专利代理事务所(普通合伙) 32385 | 代理人： | 刘巍 |
| 地址： | 100000 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 松果 体细胞 分离 培养 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种鸡原代松果体细胞的分离方法，所述方法包括：
(1)无菌条件下取出16日胚龄的胚胎期鸡的松果体组织，迅速放置于含有1％三抗的PBS中；
(2)用含有1％三抗的PBS清洗组织3～4次，去除外膜和周围血管；
(3)组织块剪碎置于0.25％胰蛋白酶中消化15 min，加入完全培养基终止消化，1000r/min离心收集沉淀，用细胞接种液重悬，并调整细胞浓度为1×106个/mL；
(4)接种于细胞培养板中，转移至细胞培养箱中继续培养6～8 h后，更换为细胞培养液，继续培养，培养2天，细胞形态具有神经元样形态，可用于下一步研究；
步骤(3)中细胞接种液的配方为：78％DMEM，20％FBS，1％三抗和1％L－谷氨酰胺；
步骤(4)中细胞培养液的配方为：95.999％Neurolbasal培养基，2％的B27、1％三抗，1％L－谷氨酰胺和0.001％阿糖胞苷；
步骤(4)中细胞培养的条件为：温度为39℃，CO2浓度为5％；
所述三抗为青霉素、链霉素和两性霉素。
2.根据权利要求1所述的鸡原代松果体细胞的分离方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中的三抗需要在4℃环境下提前预冷。
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