[发明专利]一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法和培养方法

说明书

本发明提供了一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法和培养方法，属于微生物培养技术领域。本发明将游动放线菌SE50的单菌落转接于平板培养基，于25～30℃培养5～7d，选取未开花、菌落形状为椭圆形且长轴为5～10cm的菌种作为目标菌种，得到高活性阿卡波糖产生菌。未开花、菌落形状为椭圆形且长轴为5～10cm的单菌落接到种子瓶后，种子菌浓度较高，生长情况较好，发酵瓶中的效价最高，效价可达6280u/ml。本发明能够将甘油管内的高活性菌株挑选出来，进行后续的种子培养和发酵培养。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，尤其涉及一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法和培养方法。

背景技术

阿卡波糖化学名称：0-4,6-双脱氧-4-[[(1S，4R，5S，6S)4,5,6-三羟基-3-(羟基甲基)-2-环已烯-1-基]氨基]-α-D吡喃葡糖基(1→4)-D-吡喃葡萄糖，分子式：C₂₅H₄₃NO₁₈，分子量：645.63，阿卡波糖是一种新型口服降糖药，在肠道内竞争性抑制葡萄糖甙水解酶。阿卡波糖能够抑制多糖和蔗糖分解成葡萄糖，减缓糖的吸收，具有使饭后血糖降低的作用。阿卡波糖主要降低餐后高血糖，如果使用者饮食中碳水化合物占50％以上，则降糖效果更为明显，因此其适用于以碳水化合物为主食的人群。阿卡波糖是首支上市的糖苷酶抑制剂，也是目前惟一一支具有糖耐量异常适应症的药物，可使糖耐量异常患者转归为糖尿病的风险降低36％。

阿卡波糖原料是通过微生物发酵法来获得的，利用的菌株是游动放线菌SE50，给予该菌株一定的发酵条件，来获得次级代谢产物阿卡波糖的产生，其生物合成过程是在由Acb基因群编码的一系列酶的催化作用下完成的，包括42氨基24,62二脱氧葡萄糖的合成和之后的糖基化作用生成阿卡波糖。现有的菌种筛选和培养方法是将-80℃保藏的甘油管自然融解，然后用无菌吸管吸取菌液进行斜面涂布转接，斜面于28℃培养7天，菌落长满斜面形成菌苔，然后挑取斜面菌苔进行种子瓶接种，种子瓶培养2～3天，最后接入发酵瓶，于适宜的条件进行阿卡波糖的发酵。但是在甘油管保藏过程中，部分菌体衰退和活力下降，甘油管内菌株会同时存在高活性、低活性和死亡菌株，转接到斜面上之后，高活性菌株和低活性菌株都会在斜面上生长，区分不开，挑取斜面菌苔进行摇瓶转接时，会将低活性菌株和高活性菌株都转入下一步进行培养，最终导致发酵指标高低不均或指标普遍较低的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法和培养方法，本发明的方法能够筛选得到高活性阿卡波糖产生菌，进而能够保证后续发酵得到高效价指标的发酵产物。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法，包括以下步骤：

将若干游动放线菌SE50的单菌落转接于平板培养基，于25～30℃培养5～7d，选取未开花、菌落形状为椭圆形且长轴为5～10cm的菌种作为目标菌种，得到高活性阿卡波糖产生菌。

优选的，所述选取的条件还包括颜色为深黄色和/或短轴为4～8cm。

本发明还提供了一种高活性阿卡波糖产生菌的培养方法，包括以下步骤：

1)按照上述方案所述筛选方法筛选得到高活性阿卡波糖产生菌；

2)将所述高活性阿卡波糖产生菌转接至茄子瓶培养基，进行扩大培养，得到菌体；

3)将扩大培养得到的菌体转接至种子培养基，进行种子培养，得到处于对数生长期的种子液；

4)将所述对数生长期的种子液转接至发酵培养基，进行发酵培养，得到发酵产物；所述发酵产物中包含阿卡波糖。

优选的，步骤2)中所述扩大培养的温度为25～30℃；所述扩大培养的时间为5～7d。