[发明专利]一种畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法

权利要求书

1.一种畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）称取一定体积污水样本；

（2）污水样本净化和去脂，污水样品中加入MgCl₂和蛭石，混合均匀后冷冻，过滤获得液体部分；随后加入正己烷，震荡离心，弃去上层有机液体；

（3）处理后污水样本中加入Na₂EDTA，调节pH至3.0，离心取上清液；

（4）将离心过的上清液，依次通过自制小柱和PRiME HLB固相萃取柱，抽真空，其中自制小柱填料为自制活性炭和PSA混合物；

（5）用乙腈和甲醇混合液洗脱柱子，收集洗脱液；

（6）吹干，用甲醇和水溶液定容，充分溶解后过膜，液相色谱-质谱仪测定。

2.根据权利要求1所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：在步骤（1）中，样品体积根据污水来源选取10～100mL。

3.根据权利要求1所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：在步骤（2）中，污水样品中加入的MgCl₂和蛭石，比例为50:1:1，混合均匀后，将其置于-20℃冷冻1h，过滤获得液体部分；随后加入正己烷，过滤液体与正己烷比例为2:1，震荡5min，离心2min，弃去上层有机液体。

4.根据权利要求1所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：在步骤（3）中，Na₂EDTA加入量为0.1g/L，选用甲酸、硫酸或者盐酸溶液调节pH值；以5000～10000 rpm离心3～15min。

5.根据权利要求1所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：在步骤（4）中，自制小柱填料自制活性炭和PSA混合物的混合比例为1:5，其中活性炭采取大薸植株，经过风干、60～70℃烘干，粉碎后过0.1～0.2mm筛；将粉末进行限氧控温碳化：分别经过300、500和700℃碳化6h，冷却，用1 mol/L磷酸溶液浸泡12h，蒸馏水冲洗至中性，于60～70℃烘干，PRiME HLB柱子无需活化，上清液以1mL/min的速度通过萃取柱。

6.根据权利要求1所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：在步骤（5）中，6mL乙腈和甲醇混合液，乙腈：甲醇为9:1v/v，洗脱柱子速度控制在1mL/min。

7.根据权利要求1所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：还包括38种抗生素标准曲线的建立。

8.根据权利要求7所述的畜禽场污水中多种抗生素同时精准检测的方法，其特征在于：所述38种抗生素包括5种四环素类：盐酸土霉素(OTC)、多西环素（DXC）、金霉素(CTC)、去甲基金霉素(DMC)、四环素(TC)；10种喹诺酮类：氧氟沙星(OFL)、恩诺沙星(ENR)、二氟沙星(DIF)、氟罗沙星(FLE)、盐酸洛美沙星(LOM)、依诺沙星(ENO)、氟甲喹(FLU)、西诺沙星(CIN)、奥比沙星(ORB)、诺氟沙星(NOR)；15种磺胺类：磺胺二甲异嘧啶(SIM)、磺胺噻唑(STZ)、磺胺噁唑(SMX-1)、磺胺甲基嘧啶(SMR)、磺胺甲噻二唑(SMT)、磺胺邻二甲氧嘧啶(SDX)、磺胺甲噁唑(SMX-2)、磺胺异噁唑(SIX)、磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺对甲氧嘧啶(SME)、磺胺醋酰（SC）、磺胺嘧啶（SDZ）、磺胺二甲嘧啶（SDMD）、磺胺喹恶啉（SQX）、磺胺吡啶（SPD）；5种大环内酯类：罗红霉素(RTM)、克拉霉素(CLA)、螺旋霉素(SPI)、阿奇霉素（AZI）、替米考星（TIL）；3种β-内酰胺类：苯唑西林(OXA)、青霉素G(PENG)、氯唑西林(CLO)。