[发明专利]一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：S1.制备间充质干细胞外泌体；S2.将十肽‑12转导入间充质干细胞外泌体中，得到可修复皮肤的初品干细胞外泌体；S3.制备人脂肪干细胞来源外泌体；S4.制备宫内膜干细胞外泌体；S5.制备用于皮肤修复的成品细胞外泌体；S6.杀菌处理后保存。本发明通过制备间充质干细胞外泌体、可修复皮肤的初品干细胞外泌体、宫内膜干细胞外泌体和人脂肪干细胞来源外泌体，利用多种外泌体混合制备用于皮肤修复的成品细胞外泌体，使得制备的细胞外泌体对皮肤修复的能力增强，皮肤修复的速率变快。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法。

背景技术

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

目前现有的用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法还存在一些问题：对皮肤修复的能力较弱，皮肤修复的速率较慢，同时细胞外泌体内部含有少量细菌会对产品造成影响，降低产品对皮肤修复的质量，为此我们提出一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：

S1.制备间充质干细胞外泌体；

S2.将十肽-12转导入间充质干细胞外泌体中，得到可修复皮肤的初品干细胞外泌体；

S3.制备人脂肪干细胞来源外泌体；

S4.制备宫内膜干细胞外泌体；

S5.制备用于皮肤修复的成品细胞外泌体；

S6.杀菌处理后保存。

优选的，所述S1中的制备间充质干细胞外泌体具体包括以下步骤：

S101.将间充质干细胞进行传代培养，从中筛选出细胞状态良好、增殖能力强的间充质干细胞；

S102.将目的基因进行扩增，并加入酶切位点，装入载体，得到靶基因载体，将靶基因载体转至S101的间充质干细胞，得到靶基因间充质干细胞；

S103.将S102中选取的间充质干细胞使用ɑ-MEM空培养基进行培养，培养3-10h，去除杂质，分离出培养上清液；

S104.将S103中的培养上清液与Total exosome Isolation外泌体提取液混合后进行孵育，孵育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；

S105.将S104中含外泌体的浓缩液加入无菌PBS溶解后加入Total exosomeIsolation外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得间充质干细胞分泌的外泌体。

优选的，所述目的基因包括KIF3A、OVOL1、SOD1、COL5A1、MC1R、TYR、GHRHR、EDAR、FLG、MMP9、XRCC1、RAD51、HBE1或KL中的一种或多种。

优选的，所述S2中将十肽-12转导入间充质干细胞外泌体中，得到可修复皮肤的初品干细胞外泌体具体包括以下步骤：

S201.将间充质干细胞外泌体溶于含有海藻糖的PBS缓冲液中，形成混合液；

S202.将混合液和十肽-12分别加入电穿孔皿中，采用电穿孔仪进行电穿孔转导；