[发明专利]响应面法优化萌芽种子蛋白最佳缓冲液萃取试验方法

说明书

本发明公开了一种响应面法优化萌芽种子蛋白最佳缓冲液萃取试验方法，包括如下步骤：(1)种子萌发；(2)蛋白含量和抗氧化活性测定；(3)响应面法优化萌芽种子蛋白最佳萃取试验(包括萌芽种子进行缓冲液单因素萃取试验)；(4)膜过滤处理对提取蛋白的抗氧化活性影响。本发明结合当前青桐资源利用情况和豆谷类种子萌发的研究进展，分析青桐萌芽种子蛋白含量和抗氧化活性的变化，确定最佳萌发时间点。以青桐萌芽种子为材料，利用正交试验设计蛋白萃取试验，结合抗氧化活性测定，构建青桐萌发期抗氧化蛋白分离工艺，以生产高附加值的抗氧化蛋白组份，有助于实现青桐种子高附加值活性蛋白的开发利用，提升青桐整体产业链的实用和经济价值。

技术领域

本发明涉及青桐缓冲液萃取试验技术领域，尤其涉及一种响应面法优化萌芽种子蛋白最佳缓冲液萃取试验方法。

背景技术

面对食用蛋白的短缺与环境保护的双重压力，植物蛋白资源的利用与产品开发引起了全球广泛的关注。鉴于动物蛋白质出现的朊病毒、转基因、产品紧缺和成本高等风险，开发价优、安全可靠的植物蛋白，特别是木本油料种子蛋白，以满足对优质蛋白质的摄入需求，具有实际的应用价值和前景。蛋白质是生命活动的基础物质和能源物质，在种子形成、发育、萌发直至成苗的过程中都扮演着极其重要的角色，它为种子生长发育提供养料，还调控种子的各种生理生化反应和代谢过程，为种子自身的形成及成体植株的生长提供了必不可少的条件。此外，萌芽过程中包含较多的生物活性物质，如蛋白、γ-氨基丁酸(GABA)、多糖等，具有很高的开发利用价值。

青桐种子含有多种营养成分，如含有约20％粗脂肪，其中不饱和脂肪酸(棕榈油酸、油酸、亚油酸和亚麻酸)占总含量的67.02％，对心脏有保护作用，同时可抑制血糖、血脂和胆固醇的升高，具有良好的功效。亚油酸对人的大脑发育和视神经的形成具有重要作用，可促进胎儿的生长发育，并且可调节血管舒张和免疫系统。青桐种子作为中药材在医药方面有较高的利用价值，其蛋白含量约20-25％，其种子蛋白质中含有人体所需的17种氨基酸，7种为必需氨基酸，谷氨酸、精氨酸和天冬氨酸含量较高，可作为品质优良的植物蛋白质。

碱提酸沉法，核心在于用碱溶解通过搅拌的方式将植物蛋白分离出来，再通过降低溶液pH值的方法使蛋白质析出。该方法由于萃取率高，所需设备简单且易于操作，在萃取蛋白质领域有着广泛的应用，是一种常见的萃取植物蛋白的方法。但碱提酸沉法试验过程较为复杂，不易控制，且碱提取以及酸沉淀过程中，NaOH本身具有较强的碱性，对蛋白质具有腐蚀性，可使提取的种子蛋白失去生物学活性和保健功能，进而影响其提取蛋白质的品质和色泽，降低蛋白质高附加值的应用。缓冲液萃取法相比碱萃取法，蛋白得率略有下降，但所得蛋白具有较强的生物活性和保健功能，如抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗炎、降血压、血脂和抗衰等。近年来，国内对植物蛋白研究主要集中在大豆蛋白、花生蛋白、菜籽蛋白、豌豆蛋白等农作物品种，有关木本油料作物种子蛋白如青桐、核桃、油茶等开发利用，仍有待于深入研究。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种响应面法优化萌芽种子蛋白最佳缓冲液萃取试验方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种响应面法优化萌芽种子蛋白最佳缓冲液萃取试验方法，包括如下步骤：

S1：种子萌发；

S2：蛋白含量和抗氧化活性测定；

S3：响应面法优化萌芽种子蛋白最佳萃取试验；

S4：膜过滤处理对提取蛋白的抗氧化活性影响。

进一步地，所述步骤S1包括如下子步骤：

S11：将采收的青桐种子进行筛选，挑选出同株、产量较大且颗粒饱满的青桐种子约3000颗；

S12：将上述青桐种子分装在6个烧杯(1L)，用水浴锅加热(恒温40℃)，浸泡24h，每隔4h换1次水，并用玻璃棒不断搅拌，使种子受热均匀；