[发明专利]用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用，用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液包括溶剂和溶质，所述溶剂为缓冲液Tris‑HCL，所述Tris‑HCL的浓度为50Mm/L‑100Mm/L，所述溶质包括2g/L‑6g/L的表面活性剂，1g/L‑5g/L的PVP，3g/L‑6g/L的PEG6000，20g/L‑60g/L的糖类，30g/L‑60g/L的惰性蛋白，1mg/L‑5mg/L的异噬性抗体，1mg/L‑5mg/L抗红细胞抗体，0.5g/L‑1g/L的防腐剂。过滤膜前处理液具有提高微流控芯片检测的灵敏度的优点。

技术领域

本发明涉及属于微流控免疫荧光检测技术领域，更具体地说，它涉及一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液及其制备方法与应用。

背景技术

微流控技术是一种在微米尺度空间对流体进行操控为主要特征的科学技术，其技术核心是微流控芯片。微流控芯片具有检测速度快、高通量、灵敏度高、试剂消耗少等优势，近年来迅速发展。20世纪90年代，A.Mans等采用芯片提出了微全分析系统(微流控芯片)的概念，在该系统中，分析样品的进样、预处理、化学反应、分离和检测等功能实现了装备的微型化、自动化和一体化。

微流控免疫荧光检测芯片的检测原理为：全血通过检测卡上的过滤膜，将血细胞与血浆分离后，血浆流入检测卡中的混合区，其中血浆中的抗原或抗体通过与混合区中荧光标记抗体发生免疫反应，随后荧光抗体与血浆中的抗原或抗体随反应液流入微结构的流道中被固定在流道中的另一抗体捕获，通过测定其荧光强度计算待测物质的浓度。进样和对过滤膜前处理是微流控芯片工作的前两个环节。

高灵敏度是微流控芯片的主要优势之一，但也是最大的挑战之一。市面上对许多项目的检测都有极高的灵敏度需求，如BNP检测下限为5pg，cTnI检测下限为50pg等，这对微流控芯片工作的每个环节都有极高要求。为提高检测微流控检测的灵敏度，研究者们主要从改变抗体交联体系和荧光材料等方面入手。过滤膜承担着对样本前处理这一重要环节，目前普遍所用过滤膜仅发挥着从过滤红细胞和促进血浆流动两个作用。实验室前期的研究表明，过滤膜前处理的配方对项目的检测灵敏度起关键影响，对于检测阈值较高的项目如MYO的检测，通过优化交联体系等方法使用普通过滤膜仅能达到要求，但对于检测灵敏度较高的项目使用普通过滤膜则稍显不佳，因此，研制其处理配方至关重要。

发明内容

为了提高微流控芯片检测的灵敏度，本发明提供一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液。

一种用于提高免疫荧光检测灵敏度的过滤膜前处理液，包括溶剂和溶质，所述溶剂为缓冲液Tris-HCL，所述Tris-HCL的浓度为50Mm/L-100Mm/L，所述溶质包括2g/L-6g/L的表面活性剂，1g/L-5g/L的PVP，3g/L-6g/L的PEG6000，20g/L-60g/L的糖类，30g/L-60g/L的惰性蛋白，1mg/L-5mg/L的异噬性抗体，1mg/L-5mg/L抗红细胞抗体，0.5g/L-1g/L的防腐剂。

通过采用上述技术方案，缓冲液Tris-HCL提供血浆中的抗原抗体与芯片底板上包被的抗体抗原抗体免疫反应最佳的PH,离子强度；表面活性剂和PVP促进血浆流动，有利于荧光物质分散；PEG6000和糖类物质均能增强抗原抗体反应灵敏度；惰性蛋白能够对过滤膜起到封闭作用，减少非特异性吸附，增强抗原抗体反应灵敏度；异噬性抗体减少对非特异性抗原产生的反应；抗红细胞抗体提高红细胞过滤效率，减少红细胞破裂后物质对检测产生的干扰；防腐剂可提高前处理液各种成分的保存时间。

优选的，所述表面活性剂为Triton X-100、Tween20、S10、S11中的一种或者多种。

通过采用上述技术方案，Triton X-100、Tween20、S10、S11中的一种或者多种都能控制血浆流动速度，但是Triton X-100的效果最佳。

优选的，所述糖类物质为葡萄糖、蔗糖、果糖、海藻糖的一种或多种。