[发明专利]一种能够抑制SOCS3下调的微小RNA抑制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种能够抑制SOCS3下调的微小RNA抑制剂及其制备方法，微小RNA抑制剂包含如下RNA序列：5’‑CUUCCAGUCGAGGAUGUUUACA‑3’。本发明中的微小RNA抑制剂是进行了2’‑Ome化学修饰的microRNA‑30a‑5p的抑制剂，通过特异的靶向抑制microRNA‑30a‑5p，抑制内源性microRNA‑30a‑5p的基因沉默效应，提高SOCS3的蛋白表达量，改善神经炎症缓解吗啡耐受，具有靶向性强、安全性高、有效性强以及稳定性高的优点。

技术领域

本发明涉及基因调控技术领域，特别涉及一种能够抑制SOCS3下调的微小RNA抑制剂及其制备方法。

背景技术

吗啡作为阿片类的代表药物，是治疗各种原因引起的剧烈疼痛的金标准，但是长期暴露于吗啡会带来严重的副作用，例如耐受性，即随着药物的重复使用，药效降低，需要加大用药剂量或者缩短给药间隔，才能维持原有药效。吗啡耐受是极具挑战的临床问题，限制了其在疼痛治疗中的临床应用。目前有大量关于吗啡耐受机制的报道，主要包括阿片受体数量下调[1]、抑制性神经元的变化[2]以及神经炎症[3]等。越来越多的研究表明，吗啡耐受是一种包含多重行为和细胞适应性的现象，其中包括中枢神经系统中的细胞、突触和网络水平的神经元可塑性的改变。炎症因子(如IL-1β、IL-6、TNF-α等)在吗啡耐受中的作用被广泛研究。

在基础研究中，有文献报道通过抑制神经炎症缓解吗啡耐受的药物主要有AMPK激动剂(二甲双胍)[4]、全麻药(氯胺酮)[5]、局麻药(利多卡因)[6]、抗抑郁药物(文拉法辛)[7]和自噬激动剂(雷帕霉素)[8]等，但是在临床上，目前并没有公认的治疗吗啡耐受的特效药。

SOCS3(Suppressor of cytokine signaling 3，抑制细胞信号因子3)是一个重要内源性抑炎蛋白，SOCS3被鉴定为许多细胞内和病理事件交叉路口的关键蛋白[9]。众多研究表明，SOCS3基于对肿瘤还死因子(TNF)受体相关因子6(TRAF6)和转化生长因子(TGF)-β激活激酶(TAK1)的抑制作用[10]，阻断TLR4信号通路，从而抑制炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白介素1β(IL-1β)的释放，发挥抑制炎症作用。目前已有关于SOCS3在多种疾病模型中发挥抗炎作用的报道，我们前期数据已证明，芍药苷通过上调SOCS3抑制热休克蛋白70(HSP70)/toll样受体4(TLR4)信号通路抑制神经炎症缓解术后痛。此外，利多卡因作为一种局麻药和抗心律失常药能够通过激活磷酸腺苷激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK)上调SOCS3蛋白水平抑制炎症因子的释放，改善神经炎症，缓解吗啡耐受[6]，但是AMPK如何上调SOCS3的具体机制尚不清楚，目前也并无报道。在此项工作中，吸引我们的数据是，利多卡因激活AMPK对SOCS3的调控仅仅发生在蛋白水平，而对mRNA水平并没有影响。我们猜测AMPK激活后上调SOCS3可能是一种转录后调控。AMPK是一种丝氨酸/苏氨酸代谢敏感性蛋白激酶，哺乳动物的AMPK能被细胞能量状态的下降所激活，提示AMP/ATP和ADP/ATP比率的上升。越来越多研究表明激活AMPK是治疗多种代谢性疾病的有效途径，例如糖尿病[11]、肥胖[12]以及炎症[13]等，并且通过激活AMPK可以有效启动自噬[14]，维持细胞的分解代谢和合成代谢所需要的能量。但是广泛激活AMPK亦会带来众多负面影响，例如激活AMPK后启动自噬，通过为肿瘤细胞提供必要的营养成份，维持肿瘤细胞的生存，促进肿瘤细胞的生长[15]。众所周知，在临床上，吗啡多用于治疗癌痛，因此广泛激活AMPK并不是治疗吗啡耐受的最佳选择。基于以上事实，寻找AMPK调控SOCS3的中间关键分子，可能会成为缓解吗啡耐受的全新靶标分子。