[发明专利]一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒及检测方法，该试剂盒检测速度快、灵敏度高、特异性能好、变异系数小，各试剂组分稳定性良好。一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒，其特征在于，该测定试剂盒包括：包括试剂条，试剂条包括3个以上的试剂孔位，试剂条的其中两个试剂孔位封装有试剂一和试剂二、其中一个试剂孔位由链霉亲和素包被；试剂一为浓度2.2μg/mL的生物素标记的血栓调节蛋白抗体溶液，抗体由单克隆细胞株号TM2B6生产；试剂二为浓度0.16μg/mL的辣根过氧化物酶标记的血栓调节蛋白抗体的溶液，抗体由单克隆细胞株号TM3H8生产。

技术领域

本发明属于医疗器械类体外诊断领域，具体涉及一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒及检测方法。

背景技术

血栓调节蛋白（TM）是一种存在于细胞膜表面的跨膜糖蛋白，大多出现在人体的动脉、静脉、毛细血管和淋巴管的内皮细胞表面，主要是作为凝血酶受体发挥凝血的生物学功能，它能与凝血酶结合并降低凝血酶的凝血活性，能激活蛋白C的活性而起到抗凝作用。

人体内血栓调节蛋白的含量与多项疾病有关，最常见的是当人体正常的内皮细胞发生病变或受损时，常引起血栓调节蛋白的表达、分泌异常、释放入血，从而引起膜表面和血浆中血栓调节蛋白含量变化。

因此，血浆血栓调节蛋白的含量能反应机体内皮细胞状态，是判定体内内皮细胞是否损伤的最可靠指标。由于该标志物参与人体的多种生理功能，在疾病的发生发展过程中起到了重要作用，因此建立一种血浆中血栓调节蛋白快速免疫检测方法来对相关疾病进行辅助诊断、疗效观察、预后判断等具有普遍的临床意义。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒；第二，本发明还提供了适用该试剂的检测方法；第三，本发明引入了一种新的设计，将试剂装在特殊的试剂条中，实现单人份检测的要求。该试剂盒用于定量测定血浆中的血栓调节蛋白的浓度。

一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒，其特征在于，该测定试剂盒包括：

包括试剂条，所述试剂条包括3个以上的试剂孔位，所述试剂条的其中两个试剂孔位封装有试剂一和试剂二、其中一个试剂孔位由链霉亲和素包被；

试剂一为浓度2.2μg/mL的生物素标记的血栓调节蛋白抗体溶液，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TM2B6；

试剂二为浓度0.16μg/mL的辣根过氧化物酶标记的血栓调节蛋白抗体的溶液，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TM3H8；

所述测定试剂盒还包括洗液、校准品、底物溶液；

所述洗液为pH 7.5，含1%吐温-20，0.1%Proclin300，0.05M的Tris-HCl溶液；

所述校准品包括浓度为0 TU/mL、5 TU/mL、40 TU/mL、100TU/mL、200TU/mL的血栓调节蛋白抗原溶液；

所述底物溶液包括底物A和底物B，底物A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，底物B为含有0.06%Na₂B₄O₇ ，pH5.0的水溶液。

检测方法及步骤：

使用上述试剂盒检测血栓调节蛋白的方法，包括以下步骤：

第一步：将30μL待测样本、100μL生物素标记的血栓调节蛋白抗体加到包被板中,混匀并反应，37摄氏度，孵育10分钟，反应后用300μL洗液洗涤5次；

第二步：将100μL辣根过氧化物酶标记的血栓调节蛋白抗体加入链霉亲和素包被板中混匀并反应，37摄氏度，孵育10分钟，反应后用300μL洗液洗涤5次；

第三步： 向上述洗涤后的反应孔中依次加入底物A为50ul，底物B为50ul混匀，在化学发光分析仪中测定发光强度；