[发明专利]Shorr染色试剂的应用和染色方法

说明书

本发明公开了Shorr染色试剂的应用和染色方法，涉及辅助生殖技术领域。本发明公开Shorr染色试剂在制备精子形态诊断试剂盒中的应用，该诊断试剂盒的样本为睾丸穿刺活检组织冰冻切片。该试剂盒以新鲜的睾丸穿刺活检组织冰冻切片作为染色对象，能够将精子各部分染成不同的颜色以及将精子与背景细胞有效区分，提高精子的识别度，缩短对精子病理形态的诊断时间。

技术领域

本发明涉及辅助生殖技术领域，具体而言，涉及Shorr染色试剂的应用和染色方法。

背景技术

随着辅助生殖技术尤其是卵细胞胞质内单精子注射技术的发展，为无精子症患者的治疗带来了突破性的进展。该技术是使用显微操作技术将精子注射到卵细胞胞浆内，使卵子受精。临床上成功提取精子，特别是高质量的精子是单精子注射治疗的前提。睾丸穿刺取精术是无精子症患者获得精子的主要方法。睾丸穿刺活检组织病理诊断能直接观察生精小管内精子发生状态及损伤程度，能准确评价无精子症患者睾丸内的生精状态及是否存在精子，是预测睾丸内精子提取成功率的最好指标。但睾丸活检常规病理诊断报告需2-3个工作日才发出，无法实时给临床睾丸取精提供可靠的诊断依据。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供Shorr染色试剂的应用和染色方法，本发明首次将Shorr染色试剂用于制成针对睾丸穿刺活检组织冰冻切片的染色试剂盒，该试剂盒以新鲜的睾丸穿刺活检组织冰冻切片作为染色对象，能够将精子各部分染成不同的颜色以及将精子与背景细胞有效区分，提高精子的识别度，缩短精子病理诊断的时间。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供Shorr染色试剂在制备精子形态诊断试剂盒中的应用，所述诊断试剂盒的样本为睾丸穿刺活检组织冰冻切片。

采用新鲜的睾丸穿刺活检组织做冰冻切片快速病理诊断，可将病理报告时间缩短至30min以内，无疑能实时助力睾丸取精术，提高取精成功率。

而现有的新鲜组织做冰冻切片快速病理诊断都是新鲜组织冰冻切片后通常进行HE染色，接着在显微镜下观察组织结构和细胞形态，做出快速病理诊断。但本发明的发明人发现，由于新鲜睾丸穿刺活检组织富含水分，冰冻切片会造成细胞碎裂，会影响精子形态识别。其次，生精小管内细胞成分众多，各种细胞不同切面的常规HE染色有时会出现类似精子的形态，干扰精子的识别。此外，组织切片无法确保能观察到精子头体尾的完整形态，亦造成精子识别的困难。

本发明的实施例通过研究发现，采用shorr染色在新鲜的睾丸穿刺活检组织冰冻切片中能特异性将精子着色，与生精小管内其他细胞成分对比度极高，远高于其他的组织化学染色方法例如HE染色，标准巴氏、Diff-Quik等，这超乎了本发明的预料，即shorr染色在睾丸穿刺活检组织冰冻切片中可快速特异识别精子，提高精子的对比度，实时助力临床取精术，提高取精成功率。

基于此，本发明首次提供了Shorr染色试剂的一种新的用途，将其制备成精子形态诊断试剂盒或染色试剂盒，且以睾丸穿刺活检组织冰冻切片作为染色对象，一方面缩短对精子病理形态的诊断时间，另一方面，提高精子的可识别度，提高取精成功率。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述Shorr染色试剂包括如下试剂中的至少一种：固定剂、苏木素染液、酸性乙醇和Shorr染液。

上述试剂能够将睾丸穿刺活检组织冰冻切片中的精子进行特异性着色，提高精子的可识别度。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述睾丸穿刺活检组织冰冻切片由如下方法制备：对新鲜睾丸穿刺活检组织冷冻包埋，然后切片，得到所述睾丸穿刺活检组织冰冻切片。

另一方面，本发明提供一种精子的染色方法，所述方法不以疾病的诊断为目的，采用Shorr染色试剂对睾丸穿刺活检组织冰冻切片染色。