[发明专利]农用芽孢杆菌液态菌剂的保存方法

说明书

本发明公开了一种农用芽孢杆菌液态菌剂的保存方法，该方法是将芽孢杆菌液态菌剂调节pH值至中性后，加入保护剂，密封，室温储存；其中，每体积份农用芽孢杆菌液态菌剂加入由0.8‑1重量份山梨酸钾、0.5‑0.7重量份甘油、2‑3重量份葡萄糖及3‑5重量份磷酸二氢钾组成的保护剂，体积与重量的对应关系为g与L。本发明通过限制芽孢杆菌液态菌剂芽孢形成率及pH值、调整保护剂配比，用于农用芽孢杆菌液态菌剂的保存，显著提高保存效果、菌体死亡率均不高于18.5%、降低成本。

技术领域

本发明属于液态菌剂存储技术领域，涉及一种液态菌剂的保存方法，具体地说是农用芽孢杆菌液态菌剂的保存方法。

背景技术

农用微生物菌剂是指目标功能菌经过发酵扩繁后加工制成的一种活菌制剂。施用农用微生物菌剂可以增强土壤生物活性、改善土壤结构、增强土壤保水保肥能力、减少土传病害、促进作物生长、提高作物产量和质量。农用微生物菌剂可直接作为微生物肥料，也可用于生物有机肥的生产。芽孢杆菌是一类重要的生物防治菌，具有繁殖快、抗逆性强和存活时间长等特点，同时还能够产生抗菌物质或促生物质，有些芽孢杆菌还具有固氮、溶磷和解钾的能力，是农用微生物菌剂中最常使用的微生物种类。

按照剂型，农用微生物菌剂可分为固态和液态两种类型。目前国内外的农用微生物菌剂市场上以固态菌剂为主，然而，相比于固态菌剂，液态菌剂具有制备工艺简单、生产成本更低，使用更方便等优势，具有较大应用前景；但液态菌剂在常温的储存、运输及销售过程中，由于营养贫乏、温度胁迫和低氧等不利的环境条件造成菌剂活菌数快速降低、保质期短，尤其，枯草芽孢杆菌剂在室温下储存2个月，菌体死亡率高达31％，严重影响了其在农业生产上的应用。

申请号为201410551199.7、201510617246.8和201710641676.2的中国专利申请均提供了提高液态菌剂稳定性及保藏效果的方法，但上述方法操作复杂、生产成本高且保存过程中菌体死亡率及保质期皆不理想，有很大的提升空间。

发明内容

本发明的目的，是提供一种农用芽孢杆菌液态菌剂的保存方法，通过限制芽孢杆菌液态菌剂芽孢形成率及pH值、调整保护剂配比，实现提高农用芽孢杆菌液态菌剂的保存效果、降低成本的目的。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

农用芽孢杆菌液态菌剂的保存方法，它是将芽孢杆菌液态菌剂调节pH值至中性后，加入保护剂，混匀，密封，室温储存；

其中，每体积份农用芽孢杆菌液态菌剂加入由0.8-1重量份山梨酸钾、0.5-0.7重量份甘油、2-3重量份葡萄糖及3-5重量份磷酸二氢钾组成的保护剂，体积与重量的对应关系为g与L。

因此，1L芽孢杆菌液态菌剂加入保护剂后，保护剂组分的终浓度为山梨酸钾0.8-1g/L、甘油0.5-0.7g/L、葡萄糖2-3g/L及磷酸二氢钾3-5g/L。

作为本发明的一种限定，所述芽孢杆菌液态菌剂是将芽孢杆菌发酵至芽孢形成率≥90％，pH为4.8-6.3，收集发酵液，即得芽孢杆菌液态菌剂。

其中，本发明对芽孢杆菌的发酵培养基及发酵条件没有特定的要求，所得芽孢杆菌液态菌剂均可通过本发明的方法进行保存。

作为本发明的另一种限定，所述调节pH值至中性是通过添加0.1-0.3mol/L的氢氧化钠溶液调节。

作为本发明的第三种限定，所述混匀后密封前经灌装处理，把芽孢杆菌液态菌剂灌装到塑料桶或罐中，密封，防止杂物或蚊虫进入。

作为本发明的第四种限定，所述室温储存，为于16-26℃避光储存，于阴凉处避免阳光直射。

作为本发明的第五种限定，所述芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌或蜡状芽孢杆菌。