[发明专利]一种铁甲草幼苗不定芽诱导及植株高效再生方法

说明书

本发明公开了一种铁甲草幼苗不定芽诱导及植株高效再生方法。本发明直接由铁甲草的无菌苗作为外植体进行不定芽的诱导，约2周即开始分化不定芽，在一棵植株上短时间内可获取多个分化不定芽；当铁甲草不定芽长至高2cm以上，将不定芽转接到生根培养基生根，形成再生植株。通过不定芽诱导途径得到不定芽效率与传统通过种苗的茎段、叶片、根段等组织伤口诱导愈伤相比，极大缩短了获得再生植株的时间，极大地降低了铁甲草的培育成本。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种铁甲草幼苗不定芽诱导及植株高效再生方法。

背景技术

铁甲草(Cassia mimosoides Linn.)为豆科决明属植物，又名山扁豆，学名是含羞草决明。一年生或多年生亚灌木状草本。分布于广东、安徽、广西、四川、台湾等地。决明属的很多植物，在民间已经被作为药材使用，该属植物有着多方面的药理活性，用于治疗各种疾病，如腹泻。铁甲草最初记载于明朝《救荒本草》，为药食同源，全草可药用，性平，味甘、微苦，清热解毒，健脾利湿，通便等。其幼嫩茎叶可以泡茶以根治痢疾。主治黄疸，暑热导致的吐泻，小儿疳积水肿，疔疮痈肿，毒蛇咬伤等。铁甲草的化学成分包括黄酮类、槲皮素、甾醇和蒽醌类等，国内外关于铁甲草药理活性的研究主要集中在其保肝作用上。早期日本学者发现铁甲草中的蒽醌类化合物抑制脂肪酶的作用较强，可防止和改善肝脏肥大、体形肥胖及高脂饮食引起的高甘油三酯血症等。沈创鹏等同样发现铁甲草水提物具有降脂疗效及对肝组织的保护作用。通过对铁甲草化学成分的深入分析，张纪达等发现铁甲草醇提物可以抑制二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化，具有一定的保肝活性，其机制可能与其中的化学成分大黄素、齐墩果酸有关。此外有关学者还对铁甲草的水煎液进行了乙肝病毒性肝炎、酒精性肝炎以及自身免疫性肝炎的研究，比如对小鼠酒精和CCl₄造成的急性肝损伤的保护作用。在抗氧化活性方面，研究发现铁甲草乙酸乙酯萃取液黄酮和酚类含量高，其对DPPH清除能力也较好，有较强的抗氧化活性。黄丽等人选用过氧化氢制备具有损伤直接、短时间造成急性损伤特点的肝细胞损伤模型。在高剂量铁甲草干预后，肝细胞存活数量较多，结构完整，ALT、AST、MDA水平下降，GSH-px、GSH水平上升。表明铁甲草可能具有清除自由基，拮抗脂质过氧化反应，提高抗氧化物GSH-px、GSH的含量、降低氧化物MDA水平，保护线粒体膜和肝细胞膜作用。

铁甲草野生于荒山坡地，喜湿润气候，高温多雨季节生长较快，不耐寒。现人工科学栽培，利用种子繁殖时，播种前用45℃热水将种子浸泡24小时。多用条播法播种，结合浇水覆盖细土3厘米左右。亩播种量3千克左右。保持播种沟湿润，以促苗和加强苗木。铁甲草生长期间，要注意病虫害的防治，加强田间管理。通常产区春播者在第2年秋季采收，秋播者在第3年秋季采收，这时，根系会长得很结实，营养成分会积累起来，品质好。铁甲草栽培2年后的，种子续断到9月下旬会陆续成熟，收获、干燥和脱粒。有性繁殖周期长，不利于优良性状的遗传。植物组织培养技术可将植物的组织、器官、胚胎等进行离体培养，使其在短期内成长为完整植株。目前，组织培养在植物快速繁殖、单倍体育种、种质资源保存等方面得到了广泛运用，组织培养技术具有成本低，效率高，环境条件可控等优点，可减少误差、在短时期内获得大量无菌苗。

目前，国内外的研究主要集中在铁甲草化学组分研究与药理学研究，对铁甲草组织培养的研究相对较缺乏。这为铁甲草组织培养技术的系统研究提供了研究空间和研究价值。发展和建立铁甲草快速生长的组织培养育种体系，对大量培育种苗、满足人工栽培和以及保护野生铁甲草资源非常重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种铁甲草幼苗不定芽诱导及植株高效再生方法。

本发明基于梅州客家地区对铁甲草日益增长的实际需求以及为铁甲草化学成分及药理活性深入分析原材料的获取提供方便，拟采用组织培养技术人工培育铁甲草，以期显著提高铁甲草种苗繁育速度和质量，一方面可以解决铁甲草自然繁殖周期时间较长的问题；另一方面，为更进一步了解铁甲草药理活性分析及保肝应用等基础研究提供原材料支持。