[发明专利]一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白及其单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白及其单克隆抗体，属于生物技术领域，本发明利用大肠杆菌表达与纯化重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白，提供了重组人VASN蛋白LRR结构域表达载体，并对所诱导表达出的重组人VASN蛋白LRR结构域进行过Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化及鉴定，以重组VASN蛋白LRR结构域蛋白作为免疫原对小鼠进行免疫，利用细胞融合技术制备出针对VASN蛋白LRR结构域的杂交瘤细胞株，以及该杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体能够高特异性地结合VASN抗原，具有很高的特异性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白及其单克隆抗体。

背景技术

人Vasorin(VASN)，又称SLIT-like2，在VASN的机制研究发现其主要通过下调TGF-β参与损伤血管的应答反应，最终影响血管壁的形成。通过结合TGF-β，减弱TGF-β的信号传导，吸引血管内皮细胞的迁移和诱导其形成血管样结构，并抑制白细胞的迁移。TGF-β与肿瘤发生、发展密切相关，在调节肿瘤细胞的增殖和分化、抑制机体免疫功能、增加血管生成、诱导细胞外基质的产生而促进肿瘤的侵袭和转移中均具有重要作用。而在肿瘤的发展过程中，肿瘤诱导的新生血管形成、肿瘤细胞和内皮细胞之间的“通讯”一直被认为是最重要的。由此可见，VASN与肿瘤的关系十分密切。但至今尚缺乏针对VASN的具有高特异性的抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白及其单克隆抗体，以解决上述现有技术存在的问题，该单克隆抗体具有可以高特异性的结合人体中存在的VASN抗原。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。

本发明还提供一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供一种重组载体，包含上述的重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白的基因，所述重组载体为pET30a(+)载体。

本发明还提供一种重组工程菌株，包括上述的重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白的基因或上述的重组载体。

进一步地，所述重组工作菌株为大肠杆菌BL21(DE3)。

本发明还提供一种上述的重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白的基因、上述的重组载体或上述的重组工程菌株在表达重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白中的用途。

本发明还提供一种VASN杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

a.采用上述的VASN蛋白LRR结构域蛋白免疫动物；

b.将所述动物的脾细胞或淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；

c.筛选得到VASN杂交瘤细胞株。

进一步地，所述动物为小鼠，所述VASN蛋白LRR结构域蛋白与佐剂混合后，以皮下注射方式免疫动物，所述VASN蛋白LRR结构域蛋白与佐剂的体积比为1:1。

本发明还提供一种上述的制备方法制备得到的VASN杂交瘤细胞株。

本发明还提供一种由上述的VASN杂交瘤细胞株分泌的VASN单克隆抗体。

本发明公开了以下技术效果：

目的蛋白表达纯化方法简易，成本低，经过Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化，最终可以得到高产率、高纯度的重组蛋白。