[发明专利]一种彩叶粗肋草组培工厂化生产的方法

权利要求书

1.一种彩叶粗肋草组培工厂化生产的方法，其特征在于：所述该彩叶粗肋草组培工厂化生产的方法所需要的原料有彩叶粗肋草植株、酒精、多菌灵1000倍液和培养基。

2.根据权利要求1所述的一种彩叶粗肋草组培工厂化生产的方法，其特征在于：所述彩叶粗肋草组培工厂化生产的方法如下：

（一）器具灭菌

接种用的器具除经过高温消毒外，还需在接种过程中避免交叉污染，即用剪刀、镊子对植物茎段进行处理的过程中，每使用1次后，需在酒精灯火焰上灼烧或者插入灭菌器中，轮换使用，接种人员要注意个人卫生，特别是手要认真清洗，并用70%酒精进行消毒，还时常用酒精棉球擦手；用70%酒精擦拭需继代转接的培养瓶；在操作区内，不要放入过多的待用培养基，避免气流被挡住；接种者应当熟练操作技术，做到操作娴熟、干练；

（二）选种

选取生长良好、无病害且叶形、叶色美观的彩叶粗肋草植株，洗净植株上的泥土，剥掉叶片，取中间的茎段，将处理好的粗肋草外植体在超净工作台上用酒精浸泡15~20s，再放入0.1%升汞中浸泡10~12min，后用无菌水冲洗3~5次，冲洗完成后的彩叶粗肋草植株再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，上述操作要时间短，速度快，技术到位，防止交叉污染；

（三）初代培养

将上述选种后的彩叶粗肋草茎段在超净工作台下用灭了菌的手术刀将整个茎段切成单节茎段，接种于初代培养基：MS+6BA4.0ml/L+NAA0.05ml/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6g/L，pH5.8~6.0中，在26(±3)℃，光照10~12h，光强1200~1800lx的环境中培养，初代培养主要为获得无菌材料和无性繁殖，初代培养建立的无性繁殖系包括茎梢、芽丛、胚状体和原球茎，15~20d后，茎段节间处开始萌发小芽，待小芽长至2~3cm即可进行继代培养；

（四）继代培养

在初代培养的基础上所获得的芽、苗、胚状体和原球茎等数量均不多，因此还需要使其进行进一步的增殖，从而增加芽、苗、胚状体和原球茎等的数量，将初代培养后得到的2~3cm的芽移入继代培养基：MS+2.0ml/L+TDZ0.1ml/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6g/L，pH5.8~6.0中进行继代培养，在26~28℃，光照10~12h，光强2200~2500lx的环境中培养，待小芽处长出丛生芽，且丛生芽长2~3cm时，即可进行下一次继代培养，在快速繁殖中初代培养只是一个必经过程，而继代培养则是经常性不停的进行的过程，因此从某种意义上来说，增殖只是储备母株，而生根材质增殖材料的分流，生产出产品，因此当继代5~7次获得足够多的芽后，再培养一段时间，待彩叶粗肋草长至5~6cm即可进行生根培养，继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养；

（五）生根培养

将继代培养后得到的长2~3cm的粗肋草单芽接种到生根培养基：1/2MS+IBA0.5~0.8ml/L+NAA0.1ml/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6g/L，pH5.8~6.0中进行生根培养，在26~28℃，光照10~12h，光强2000~2300lx的环境中培养，且光线为强度较高的漫射光。进行生根培养5~7d幼苗开始生根，在25~30d幼苗根系基本完整，可进行炼苗移栽，试管内生根壮苗阶段，目的是为了成功地移植到试管外部的环境中，使试管苗适应外界的环境因子；

（六）生根移苗

试管移栽为组织培养的重要环节，为保证移栽的成活性，应选择合适的基质，并配合以相应的管理措施，才能保证整个工作有条不紊的进行，在炼苗的过程中因采用控制水、肥料、光照以及温度等措施，使根苗逐渐的适应外界的环境，使生理、形态和组织发生相应的变化，而后将生根培养后得到的彩叶粗肋草生根苗放入荫棚中炼苗一周，后将彩叶粗肋草苗取出，洗净根部的培养基，以防残留培养基滋生杂菌，但也要注意护根，放入多菌灵1000倍液中浸泡3min，再移栽至遮荫拱棚中，栽植时在地面上插一个孔洞，而后将小苗插入，注意幼苗较嫩，要防止将其弄伤，行间距为10cm-5cm，后浇足水，移栽后的需要注意遮荫保湿，待粗肋草幼苗发新根后即可施少量水肥；

（七）田间管理

常常观察小苗的生长情况，当小苗有生长趋势时，可铸件减少湿度，将拱棚两端打开通风，并且可适当减少喷水次数，使幼苗适应湿度较小的条件，以便于后续揭开薄膜，从而更加利于小苗的生长，并且要定期对小苗周围的野草进行拔除，避免野草影响小苗的生长。