[发明专利]一种重组凝血因子VIII及其应用

说明书

本发明涉及一种重组凝血因子VIII及其应用。所述重组凝血因子VIII的B结构域包括80％以上的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。所述重组凝血因子VIII的B结构域经过基因改造，富含糖基化位点，具备高效的凝血功能且易于分泌到胞外，易于与辅助因子如凝血酶(FIIa)等相互作用，此外，抗体反应低，能够有效保障治疗效果，降低免疫排斥风险，节约治疗成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种重组凝血因子VIII及其应用。

背景技术

A型血友病(HemophiliaA，HA)又名遗传性抗血友病球蛋白缺乏症或FⅧ缺乏症，是一种是由凝血因子VIII的基因(FⅧ基因或F8基因)的遗传缺陷引起的凝血障碍。目前对HA的治疗主要为基于血浆源性凝血因子或外源培养的重组蛋白的蛋白置换疗法(proteinreplacement therapy，RPT)，但PRT存在半衰期短、成本高及治疗周期长等局限性。

基因治疗(gene therapy)是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的。目前，基因治疗被认为是最有前景的HA治疗方法。

有研究对人类F8基因的分析显示其表达蛋白具有明显的结构域，表示为A1-A2-B-A3-C1-C2，B结构域由非常大的外显子编码，含有由连接寡糖的天门冬酰胺(N)组成的高度保守区。Miao等人指出，B结构域的部分缺失，保留N端226-氨基酸延伸，其中包含六个完整的天门冬酰胺连接的糖基化位点，能够使F8的体外分泌增加10倍(参见Miao,H.Z.,Sirachainan,N.,Palmer,L.,Kucab,P.,Cunningham,M.A.et al.Bioengineering ofcoagulation factor VIII for improved secretion.Blood,2004,103(9),3412-3419.)。但目前利用B结构域缺失的F8基因(F8-BDD)进行基因治疗的方法存在蛋白分泌和功能较低、F8病毒载体转染效率低以及产生抗体和抑制物反应(免疫排斥)等问题。

综上所述，提供一种重组凝血因子VIII，具备高效的凝血功能，且体内抗体反应低，对于HA基因治疗领域具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种重组凝血因子VIII及其应用，所述重组凝血因子VIII富含糖基化位点，具备高效的凝血功能且易于分泌到胞外，能够高效纠正A型血友病，且抗体反应低。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种重组凝血因子VIII，所述重组凝血因子VIII的B结构域包括80％以上的SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

本发明的重组凝血因子VIII中富含糖基化位点序列，具备高效的凝血功能且易于分泌到胞外，易于与辅助因子如凝血酶(FIIa)等相互作用，此外，抗体反应低，能够有效保障治疗效果，降低免疫排斥风险，节约治疗成本。

SEQ ID NO.1：

EDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNATTIQNVSSNNSLSNNLISTDNTSSEENNDSKNVSSNNSAPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVT。

SEQ ID NO.2：