[发明专利]一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用

说明书

本发明提供一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用，属于生物技术领域。本发明将双斑东方鲀的卵巢进行分离培养，获得其原代细胞，并进行连续继代培养，最终建立稳定的双斑东方鲀卵巢细胞系。该细胞系的细胞性状优良，以长纤维状细胞为主，分裂旺盛，传代时间短，易消化，贴壁率好，耐饥饿。本发明的双斑东方鲀卵巢细胞系为双斑东方鲀性腺发育机制研究提供了一种新的体外模型。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用。

背景技术

双斑东方鲀 ( Takifugu bimaculatus)，属鲀形目，鲀科，东方鲀属，为近海暖温性底层鱼类，分布于我国南海、东海和黄海南部。其经济价值高、开发潜力大的水产珍品。双斑东方鲀是福建省养殖的河鲀鱼主要品种，是鱼虾贝生态混养模式主要搭配养殖品种，对于阻断对虾病害的水平传播、提高养殖成活率起到重要作用，目前在福建省已经达到一定的规模。2015年养殖面积8万亩以上，产量1.1万吨左右，产值8亿元以上，漳浦县为河豚鱼主产区，产量占全省90%以上。

建立鱼类细胞系能为鱼类病毒分离、抗病毒机制、疫苗研发、转基因技术、嵌合体组织工程等研究提供极大的便捷，且设施人力等资源要求相对活体实验低，重复性好，研究周期短。细胞培养为开展鱼类毒理、病理、遗传分析等研究提供了重要的体外模型。

目前关于双斑东方鲀细胞系的建立未见报道；仅有关于其他东方鲀属的部分细胞系的建立及少部分分离培养。王培军等采用组织块培养和细胞悬液培养暗纹东方鲀（ Takifugu obscurus）的肾脏组织对暗纹东方纯组织细胞的原代培养方法进行了研究和探索，但有并达到预期的效果；Samuel等对星点东方鲀（ Takifugu niphobles）和红鳍东方鲀（ Takifugu rubripes）大脑、肝脏、鳍、脾脏、肾脏、鳔和肌肉进行原代培养，其中眼细胞的生长速度最快，两种河鲀的各种组织中衍生的细胞进行多次继代培养，红鳍东方鲀眼细胞在近一年的过程中已经在连续培养中维持超过60次继代。Zhang等（Zhang et al.Initiation of two ovarian cell lines from Fugu rubripes ( Temminck et. Schlegel)[J]. 海洋学报(英文版), 2015. 701-711.）从红鳍东方鲀卵巢中建立了称为TSOC1和TSOC2的细胞系，TSOC1由梭形上皮样细胞组成，而另一种是鹅卵石样细胞，并研究了包括温度，FBS浓度和pH在内的生长要求条件。Yang等已建立红鳍东方鲀精巢细胞系，命名为TRS，并证明了可有效地将外源基因或蛋白质传递到TRS中。

本研究将双斑东方鲀的卵巢进行分离培养，获得其原代细胞，并进行连续继代培养，最终建立稳定的双斑东方鲀卵巢细胞系，为双斑东方鲀性腺发育机制研究提供了一种新的体外模型。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有问题，提供一株双斑东方鲀卵巢组织细胞系及其应用。本发明将双斑东方鲀的卵巢进行分离培养，获得其原代细胞，并进行连续继代培养，最终建立稳定的双斑东方鲀卵巢细胞系，为双斑东方鲀性腺发育机制研究提供了一种新的体外模型。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株双斑东方鲀卵巢细胞系，所述细胞系分类命名为双斑东方鲀卵巢细胞FGO，已于2021年4月26日于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：C202175，保藏地址为中国武汉，武汉大学。

一株双斑东方鲀卵巢细胞系(FGO)的构建方法，包括以下步骤：