[发明专利]一种检测N,N-二异丙基碳二酰亚胺的方法及应用

说明书

本发明涉及基因毒杂质检测技术领域，具体公开了一种检测N,N‑二异丙基碳二酰亚胺的方法及应用。本发明的检测N,N‑二异丙基碳二酰亚胺的方法，采用气相色谱‑质谱联用方式进行待测物中N,N‑二异丙基碳二酰亚胺的检测；气相部分的升温程序为：起始温度50‑70℃，保持3‑7min，以20‑40℃/min的速率升温至250‑300℃，保持2‑5min。本发明可直接进样检测，无需进行样品前处理，检测时间短，信号响应强，灵敏度高，适用性广。

技术领域

本发明涉及基因毒杂质检测技术领域，具体地说，涉及一种检测N,N-二异丙基碳二酰亚胺的方法及应用。

背景技术

近年来，随着原料药中基因毒杂质研究要求的提高，使得如偶联剂N,N-二异丙基碳二酰亚胺等物质被确定为基因毒杂质，成为原料药检测中必需研究内容。基因毒性杂质来源于原料药合成过程中的起始物料、中间体、试剂和反应副产物，也可能是由药物在合成、储存或者制剂过程中降解产生的。其特点是在低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生，对人体用药安全性产生威胁。在现有的药品质量控制标准中，需进行严格控制。

偶联剂N,N-二异丙基碳二酰亚胺(N,N'-Diisopropylcarbodiimide)，英文简称DIC，是一种淡黄色透明液体，在原料药合成过程中，是最为常用的有机合成偶联剂。自1955年，该类物质用于多肽合成，N,N-二异丙基碳二酰亚胺在许多化学领域得到广泛应用。在有机合成反应中，氨基与羧基的偶联反应，DIC是首选缩合剂，例如在奈西立肽、缩宫素、生长抑素、加压素等多肽类药物，聚乙二醇单甲醚等医用辅料，以及涉及氨基和羧基缩合反应的有机合成中，已广泛使用。

目前，针对偶联剂N,N-二异丙基碳二酰亚胺的检测无成熟可靠稳定的方法。已有专利采用液相色谱质谱联用对N,N-二异丙基碳二酰亚胺含量进行检测，但其需对样品进行衍生前处理，检测结果稳定性和重复性较差。如样品中存在衍生产物，则不能准确定量N,N-二异丙基碳二酰亚胺含量。因此还需要对其检测方式进行进一步研究。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明的目的是提供一种简单快速，灵敏度高，无需衍生等前处理操作，可以实现原料药中N,N-二异丙基碳二酰亚胺的精准质量控制的方法。

为了实现该目的，本发明的技术方案如下：

一种检测N,N-二异丙基碳二酰亚胺的方法，其采用气相色谱-质谱联用方式进行待测物中N,N-二异丙基碳二酰亚胺的检测；气相部分的升温程序为：起始温度50-70℃，保持3-7min，以20-40℃/min的速率升温至250-300℃，保持2-5min。

优选，气相部分的升温程序为：起始温度60℃，保持5min，以30℃/min的速率升温至250℃，保持2min。

本发明充分考虑N,N-二异丙基碳二酰亚胺在色谱柱的保留情况、与待测品结合后的情况，以及溶剂中可能产生的干扰峰情况，对气相部分的升温程序进行了设置，此方式使样品在进样口气化物质能够完全流出色谱柱，不会对后续的进样产生干扰，还可有效消除溶剂中的干扰峰，实现了理想的稳定性、重现性和准确性。

本发明中，气相部分的载气为氦气，流速范围为0.9～1.1ml/min，进样分流比为(5-20)：1。

本发明的分流比和载气流速的配合，可兼顾N,N-二异丙基碳二酰亚胺的信号响应、出峰峰型和拖尾因子等要求，使N,N-二异丙基碳二酰亚胺具有良好对称高斯峰型，消除溶剂效应产生的干扰，且可兼顾流速对保留时间的影响，使对照品出峰时间在10min内，从而有效提高检测方法灵敏度，有利于对照品在低浓度检出，具有较低的检测限和定量限。

本发明中，采用直接进样模式，进样量为1-5μl，优选1μl。

在本检测体系中，该进样量可保证色谱峰的峰型、灵敏度和信号响应强度。