[发明专利]一种红芽芋小滴玻璃化超低温疗法脱毒的方法

权利要求书

1.一种红芽芋小滴玻璃化超低温疗法脱毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：采用梯度升温法预处理红芽芋茎尖；所述采用梯度升温法预处理红芽芋茎尖，具体包括：先于白天20-25℃，晚上20℃处理一周后，每周增加1-3℃，直至增加到白天37℃，晚上27℃，并保持1周；

步骤2：经步骤1处理后的红芽芋茎尖取0.5-1.5cm，转入基础培养基上，光照培养1-3天；之后转入含糖培养基中装载20-30min，再用PVS2脱水10-20min，然后在液氮中保存1-2天；所述基础培养基为MS+0.5-1.5mg·L KT+0.1-0.35mg·L NAA+0.1-0.4M壳寡糖；所述含糖培养基为MS+0.5-2M甘油+0.1-0.5M蔗糖；

步骤3：从液氮中取出红芽芋茎尖并浸入预热的洗涤液解冻，再用洗涤液洗涤，之后转入固体培养基中暗培养2-3天，然后光照条件下培养20-30天，分化出新芽；所述固体培养基为MS+0.5-1.5mg·L KT+0.05-0.25mg·L NAA；

步骤4：将所述新芽转入所述固体培养基培养，得到红芽芋脱毒苗；

采用梯度升温法预处理红芽芋茎尖后，转入所述基础培养基之前，还包括包埋步骤：所述包埋是利用生物炭与海藻酸钠构建的包埋剂处理红芽芋茎尖；

所述包埋剂是由如下方法制备：(1)生物炭的制备：将若干重量份的玉米秸秆与小麦秸秆粉碎后，在550-680℃碳化1-2h后，冷却至室温，过0.5-1mm筛后，得到生物炭；(2)将生物炭和海藻酸钠按照重量比1.5-2.3:1混合后，再与8-10倍体积水混合均匀，然后将混合液逐滴滴入0.8％的氯化钙溶液中，得到包埋剂；所述混合液和所述氯化钙溶液体积比为1:0.1-0.55。

2.根据权利要求1所述的红芽芋小滴玻璃化超低温疗法脱毒的方法，其特征在于，将所述红芽芋茎尖浸泡在所述包埋剂中，20-35rpm低速搅拌10-15min。

3.根据权利要求1所述的红芽芋小滴玻璃化超低温疗法脱毒的方法，其特征在于，步骤2和步骤3的光照条件均为：25℃，光照强度2500-3000lux，15-18h/d。

4.根据权利要求1所述的红芽芋小滴玻璃化超低温疗法脱毒的方法，其特征在于，所述洗涤液为MS+0.5-1.5mg·L KT+0.1-0.3mg·L NAA+0.5-0.85M壳寡糖。

5.根据权利要求1所述的红芽芋小滴玻璃化超低温疗法脱毒的方法，其特征在于，步骤4中所述新芽在25℃条件下光照培养15-20天。