[发明专利]一种贯叶金丝桃组培育苗的方法

说明书

本发明涉及药物植物育苗工程技术领域，具体涉及一种贯叶金丝桃组培育苗的方法。所述方法包括：准备外植体，无菌消毒后，经初代培育获得无菌丛生芽幼苗；将诱导苗单芽，接入继代生根一体培养基获得生根组培苗；将生根组培苗带瓶移至炼苗场，放置后，移栽入基质，后移栽大田。本发明具有组培步骤少，流程简单，周期短，成本低的优势。

技术领域

本发明涉及药物植物育苗工程技术领域，具体涉及一种贯叶金丝桃组培育苗的方法。

背景技术

贯叶金丝桃(Hypericum L.perforatum)，又名贯叶连翘，为藤黄科植物贯叶金丝桃 Hypericum perforatum L.的干燥地上部分。主要产于西南和西北各省。茎呈圆柱形，长10-100cm，多分枝，茎和分枝两侧各具有一条纵棱。小枝细瘦，对生于叶腋。单叶对生，无柄，抱茎；叶片披针形或长椭圆形，散布透明或黑色腺点。蒴果矩圆形，具泡状小突起。气微，味微苦，涩。贯叶金丝桃含金丝桃素、伪金丝桃素、异金丝桃素和大黄素-蒽酮等萘并双蒽酮类化合物，贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素等间苯三酚类成分，金丝桃苷、槲皮素、萹蓄苷、槲皮苷、异槲皮苷等黄酮类成分及挥发油等。现代药理研究表明，贯叶金丝桃提取物具有显著的抗抑郁作用，金丝桃苷对心肌缺血及脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

到目前为止，金丝桃素主要从野生贯叶金丝桃植株中提取分离，随着市场对金丝桃素需 求的逐渐增加，使得野生贯叶金丝桃资源过度被采挖，加上贯叶金丝桃自然繁殖率低，从而 造成资源的迅速减少。贯叶金丝桃的主要育苗方式以种子直接撒播的有性繁殖为主，该种方 式获得的种苗都是混杂种苗，遗传背景不一致；并且因种子细小，存在种子播种困难和成苗 率低的问题，且需要定期进行杂草清理、浇水施肥等管理，种苗生产管理难度较大。

为了保护野生资源，避免资源枯竭，因此很有必要开展贯叶金丝桃的组培研究。在国内， 贯叶金丝桃组培技术研究距今已有二十余年，陈霄鹏(“贯叶金丝桃的组培快繁”，植物杂 志,2000(03):27)使用幼嫩子房、嫩茎、叶片做为外植体，诱导产生愈伤组织，然后经过继 代、壮苗、生根环节再生植株获得贯叶金丝桃组培苗，总耗时约75-100天。陈全战和宋东杰 (“贯叶金丝桃组织培养的研究”，中国野生植物资源,2003，22(3)：42-43)同样使用幼茎 做为外植体的间接器官发生途径方式获得贯叶金丝桃组培苗，技术环节同样包括愈伤诱导、 继代、壮苗和生根。周尧等(“贯叶金丝桃离体培养及植株再生体系的建立”，安徽农业科 学，2012，40(2)：662-666)则使用幼芽做为外植体，通过启动培养、继代培养和生根培养，直接获得组培苗，总耗时约85天。丁如贤(“贯叶连翘的组织培养和快速繁殖”，第二 军医大学学报，2000，21(10))使用根、带节茎段、叶作为外植体，诱导产生愈伤组织， 然后经过丛生芽诱导，生根诱导、炼苗移栽，其移栽成活率仅为64％。因此目前贯叶金丝桃 组培育苗还存在培养周期较长、成本高、移栽成活率低的问题。

发明内容

本发明利用植物组织培养方式获得遗传背景一致的初代组培苗后，没有像传统组培方式一 样，在组培室继代、壮苗、生根，而是将初代组培苗，直接经过继代生根一体培养，同时实 现壮苗和生根获得组培瓶苗，在简化操作步骤的同时，减少了培养周期，相较传统组培方式 耗时减少8-23天。该方法炼苗出苗、移栽成活率高，且能获得遗传基础一致的种苗，同时操 作简便且安全高效，降低了生产成本，为形成贯叶金丝桃规模化种苗快繁提供技术支持. 本发明是通过以下的技术方案实现的：

1)外植体的选取和处理：准备外植体，并采用消毒剂消毒；

2)初代培养：将消毒好的外植体，接入初代培养基，获得无菌丛生芽幼苗；

3)继代和生根一体培养：将诱导苗单芽，接入继代和生根一体培养基，获得生根组培苗；

4)炼苗移栽：将生根组培苗进行炼苗，然后移栽。

进一步的，所述准备外植体阶段，外植体选自贯叶金丝桃的芽，优选自腋芽和顶芽。