[发明专利]水溶性蛋白作为外泌体提取增强剂的应用及外泌体提取试剂

说明书

本发明公开了水溶性蛋白作为外泌体提取增强剂的应用及外泌体提取试剂。所述水溶性蛋白选自动物来源蛋白、植物来源蛋白或人工合成蛋白中的一种或多种，作为增强剂使用时在溶液中的终浓度大于或等于1％。所述外泌体提取试剂包括亲水性聚合物溶液和水溶性蛋白；所述水溶性蛋白在提取试剂中的质量体积浓度大于或等于1％；所述亲水性聚合物选自聚乙二醇、葡聚糖或聚乙烯基吡咯烷酮中的一种或多种；所述水溶性蛋白选自白蛋白、球蛋白或血红蛋白中的一种或多种。本发明方案中的水溶性蛋白与亲水性聚合物配合使用沉淀法提取外泌体时，可显著提高外泌体的回收率，同时，该方法操作简单，成本低，有利于实际应用推广。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及水溶性蛋白作为外泌体提取增强剂的应用及外泌体提取试剂。

背景技术

Exosome，又称为外泌体，直径30～150nm，是一种由细胞内多囊泡体(multivesicularbody,MVB)与细胞膜融合后释放到细胞外环境中的脂质双分子膜包裹的小囊泡，其含有蛋白质、脂质和核酸，并且在各种生理和病理途径中充当细胞-细胞通信的重要介质。目前的研究表明：体液中如尿液、腹水、羊水、和脑脊液等的外泌体含量相对较低，因此，对其内容物进行检测，实现进一步的临床应用前景广阔，但现有的技术无法进行非常高效的外泌体的捕获。

目前存在的常用的分离外泌体的方法主要有以下几种：

1)超速离心法：目前应用最广泛的分离技术，也被称为外泌体提取和分离的金标准。超速离心法主要根据原始溶液中各组分的大小和密度差异获取所需组分，适用于分离沉降系数差异较大的大剂量样品组分。该方法不需要标记外泌体，避免了交叉污染，但由于耗时、成本高、结构损伤等原因，因此并不适用于大量实际应用推广。

2)超滤法：此方法虽然操作简单，但得到的外泌体纯度不高。

3)聚合物沉淀法：聚合物沉淀的方法通常以聚乙二醇(PEG)为介质，通过降低外泌体的溶解度，在离心条件下收获外泌体。聚合物沉淀法操作简单，分析时间短，适合处理样本量的样品。但在尿液、腹水、羊水和脑脊液等以及细胞培养上清中，外泌体回收率较低，不利于后续实验分析。

发明内容

本发明的目的是，提供水溶性蛋白作为外泌体提取增强剂的应用及外泌体提取试剂。旨在解决现有技术中聚合物沉淀法中外泌体回收率较低的技术问题。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

本发明提供了水溶性蛋白作为外泌体提取增强剂的应用。

作为优选实施方案，所述水溶性蛋白使用时在提取溶液中的质量体积浓度大于或等于1％，优选为大于或等于10％。

作为优选实施方案，所述水溶性蛋白在溶液pH5.0-9.0的条件下是完全溶解的。

作为优选实施方案，溶解水溶性蛋白的溶液为水溶液或盐溶液。

作为优选实施方案，所述水溶性蛋白选自动物来源蛋白、植物来源蛋白或人工合成蛋白中的一种或多种。

作为优选实施方案，所述动物来源蛋白包括体液循环来源的蛋白与组织来源蛋白；其中，体液循环来源的蛋白优选为白蛋白、球蛋白或血红蛋白。

作为优选实施方案，所述水溶性蛋白用于体液或细胞培养上清中的外泌体提取。所述体液指胸水、尿液、脑脊液、腹水、羊水等。

作为优选实施方案，所述外泌体提取的方式为聚合物沉淀法提取。

本发明还提供一种外泌体提取试剂，该提取试剂包括：亲水性聚合物溶液和水溶性蛋白；所述水溶性蛋白在提取试剂中的质量体积浓度大于或等于1％，优选为大于或等于10％。

作为优选实施方案，所述亲水性聚合物选自聚乙二醇、葡聚糖或聚乙烯基吡咯烷酮中的一种或多种。