[发明专利]一组磺胺类抗生素广谱特异性核酸适配体的筛选及其应用

说明书

本发明公开了一组磺胺类抗生素广谱特异性核酸适配体的筛选及其应用，其中核酸适配体基于SELEX技术进行筛选，以磺胺甲氧哒嗪，磺胺噻唑，磺胺甲基嘧啶和磺胺吡啶为靶标分子进行正筛选，反靶标分子为四环素、硫酸卡那霉素、头孢噻肟、恩诺沙星、苯唑西林、氨苄西林，第1～3轮为正筛选，第4～11轮为反筛选。按照上述方法筛选的核酸适配体具有能够与多种磺胺类抗生素高特异性和高亲和力结合的优点，可应用于建立同时快速检测海产品中多种磺胺类抗生素残留的比色方法。

技术领域

本发明属于食品安全与抗生素检测领域，特别涉及到一组磺胺类抗生素广谱特异性的核酸适配体的筛选及其应用。

背景技术

磺胺类抗生素（sulfonamide antibiotics，SAs）是一类传统的人工合成抗菌药物，因其价格低廉、化学性质稳定、具有广谱活性等特点，磺胺类抗生素已被广泛应用于畜牧和水产养殖。然而，由于受经济利益的驱动，违规或超标使用磺胺类抗生素从而导致畜禽肉类和水产品中磺胺类抗生素残留超标的事件时有发生，直接给人体健康带来极大的安全隐患。因此，加强对动物源食品包括海产品中磺胺类抗生素残留的筛查和检测对于保证畜禽肉类和水产品的安全消费具有重要意义。

目前，传统的用于同时检测多种磺胺类抗生素的方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱法（UHPLC）、高效液相色谱-串联质谱联用法( HPLC-MS/MS)以及免疫分析法等。但是这些方法成本高、耗时长，无法满足畜禽肉类和水产品中磺胺类抗生素残留现场快速筛查的需求。

核酸适配体是通过指数富集的配体系统进化（systematic evolution ofligands by exponential enrichment，SELEX）技术在体外筛选到的单链寡核苷酸，其不但具有与抗体相似甚至更好的高亲和力和特异性，且稳定性好，易于合成和修饰，也被尝试用于构建磺胺类抗生素的快速检测方法。但是目前已有的基于核酸适配体检测磺胺类抗生素的方法所能检测的磺胺类抗生素种类单一，难以满足实际样品的检测需求。因此，筛选具有磺胺类抗生素广谱特异性的核酸适配体，并将其应用于建立多种磺胺类抗生素同时快速准确的检测方法成为研究者努力的方向。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种筛选磺胺类抗生素广谱特异性核酸适配体的方法，还相应提供了采用上述方法筛选得到的核酸适配体，该组核酸适配体能够同时与多种磺胺类抗生素高特异性和高亲和力结合，可应用于开发海产品种磺胺类抗生素的检测方法，特别涉及基于该组核酸适配体识别、快速检测磺胺喹恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪和磺胺索嘧啶的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一组磺胺类抗生素广谱特异性核酸适配体，所述核酸适配体为核苷酸序列Sull04、Sull34、Sull43中的一条，或2条，或3条；核酸适配体的核苷酸序列如下：

Sull04：

5’-CTTACGACACGGGGTCTTGGGGTGAGTCCTGTTGTGTCAGTGTGTCGTAAG-3’;

Sull34：

5’-CTTACGACACGGGGTCTTGGGGTGAGTCCTGCTGTGTCAGTGTGTCGTAAG-3’;

Sull43：

5’-CTTACGGCACGGGGTCTTGGGGTGAGTCCTGTTGTGTCAGTGTGTCGTAAG-3’。