[发明专利]一种精准识别且稳定的真菌荧光染色液

说明书

本发明公开了一种操作简便，染色效果好，上皮细胞黄绿色与真菌蓝白色色差明显，检出率高且体系稳定易于保存的真菌荧光染色液。真菌荧光染色液中的荧光素可以高亲和力地与真菌细胞壁上的β‑多糖，如几丁质与纤维素等结合，从而标记样品中存在的真菌成分，并在荧光显微镜下可以清楚地观察到真菌形态。该染色液添加了防干扰荧光助剂，可提高荧光染料与真菌细胞壁的结合率，另在紫外激发下，荧光强度增强，使得真菌菌丝与孢子等繁殖体发出明亮的蓝白荧光，在荧光显微镜观察下，真菌轮廓清晰可见同时提高染色液组分体系的稳定性，降低染液荧光淬灭风险；且此染色液一步染色，数秒上色，操作简单，节约检测时间，上皮细胞等组织被染为黄绿色，与蓝白色的真菌色差明显，同时还可提高真菌检出率。

技术领域

本发明属于医学诊断技术领域，具体涉及一种精准识别且稳定的真菌荧光染色液。

技术背景

真菌属于真核生物，没有质体，营养方式为吸收，无吞噬作用，可引起人类，动物的疾病，称为真菌病；还可引起植物的疾病、人类过敏性疾病和真菌毒素中毒症。目前已发现真菌约有上万种，其中有大约270多种对人类具有致病性。真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剂量X线照射、免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下患者容易感染真菌；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件。近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。

真菌分为浅部真菌和深部真菌。

浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和指甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。

深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌，常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌，马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌，孢子菌丝等。

目前真菌感染常用检查方法有：直接镜检、革兰染色、吉姆萨染色、PAS法、六胺银法(GMS)、培养法、Gridley染色、粘蛋白卡红、巴氏染色法等，其中：(1)直接镜检：直接镜检的方法方便经济，可采用不染色的湿片如KOH涂片或乳酸酚棉蓝涂片。对浅表和皮下真菌感染最有帮助，一般在有菌部位发现大量真菌菌丝即可作出诊断，可在几分钟内完成，并且观察到的真菌形态可以提供有价值的临床信息；(2)革兰染色：所有真菌、放线菌均为革兰染色阳性，被染成蓝黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌及诺卡菌放线菌的感染；(3)吉姆萨染色：可用于骨髓涂片和其他标本中荚膜组织胞浆菌和马内菲青霉的检测；(4)PAS法：用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色；(5)六胺银法(GMS)：用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色；(6)培养法：指对临床标本进行培养，目的在于分离致病真菌，以明确是否存在真菌感染，特别是在直接镜检为阴性时，可从疑似患者身上采集标本，进一步进行真菌培养。一般培养超过2至4周以上依然没有真菌生长，才可报告阴性。

以上特殊染色法以及培养法的优势在于：在控制好染色或培养细节的前提下，可染出漂亮的真菌形态，容易辨识，而且其中培养法的检测准确率非常高。但是其缺点在于：1.操作过程需要严格控制时间以及温度等，稍有失误即会影响成片效果，影响结果判断，对操作人员专业技能要求比较高；2.操作繁琐，用时长(1小时左右)，培养法则需要2-4周，容易导致诊断不及时从而延误治疗；3.每种染色法需要使用的试剂多样，管理储存不便。

为了诊断真菌感染性疾病，通常采用荧光染色液，真菌荧光染色液中的荧光素可以高亲和力地与真菌细胞壁上的β-多糖，如几丁质与纤维素等结合，从而标记样品中存在的真菌成分，并在荧光显微镜下可以清楚的观察到真菌形态，所以真菌荧光染色液作为一种快速定性检测真菌的新型染色液，有着操作方便、敏感度高、准确率高的优势，可以替代传统镜检法，与真菌培养法形成完美互补，在感染早期为真菌病患者赢得最宝贵的治疗时机。