[发明专利]一种耐药型念珠菌的鉴别方法及鉴别试剂盒

说明书

本发明涉及一种耐药型念珠菌的鉴别方法及鉴别试剂盒。念珠菌是常见的致病菌，临床针对真菌感染的治疗首先应当对菌株进行分型检测，根据药敏结果选用恰当的抗真菌感染的药物治疗。目前药敏培养所需的时间较长，针对该缺陷，本发明提供了一种耐药型念珠菌的鉴别方法，采用MKT077及苯菌灵孵育待鉴别菌株，并检测孵育后菌株的红色荧光右移程度，出现明显右移的菌株即为Mdr1型白色念珠菌。该鉴别方法特异性良好、检测速度快，应用于临床检测能够有效缩短检测所需时间，具有推广价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种耐药型念珠菌的鉴别方法，还包括MKT077、苯菌灵(Benomyl)及其组合在制备耐药型念珠菌鉴别产品中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

近年来，由念珠菌引起的感染发生率逐年增加，这种增长主要是由于艾滋病的流行和现代医学技术的发展，包括器官移植、侵入性外科手术、免疫抑制疗法、大规模化疗，以及植入式医疗设备的广泛使用。其中，白色念珠菌是导致念珠菌病发生的主要原因。作为一种机会性致病真菌，它在正常条件下可与宿主共同生长，而当机体组织损伤或免疫力低下时，可能会导致从浅表粘膜感染到系统性感染的各种疾病。此外，其他念珠菌如光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌等也常被鉴定为人类病原体。

检测技术的不断改进和发展使得更多病原体得以发现，从而为更多病症得以有效治疗奠定基础。传统念珠菌的检测方法主要包括真菌选择性培养基培养法、直接显微镜镜检法、菌落PCR法、基因测序，是临床检验微生物病原体中必不可少的诊断程序。此外，甘露聚糖和抗甘露聚糖抗体的联合检测、β-1,3-D-葡聚糖检测(BDG)等特异性高、灵敏度强的检测方法也被广泛应用于临床检测。目前病原体感染在临床的准确检测往往需要1天甚至一周的时间才能得到鉴定结果。而临床数据表明，抗真菌治疗的时机对疾病发生率和死亡率有重大影响，因而快速检测感染病原体从而尽早开始抗真菌治疗非常重要。

发明内容

基于上述技术背景，本发明目的在于提供一种快速鉴别耐药菌株的方法，具体的，提供了一种Mdr1耐药型白色念珠菌的快速鉴别方法。

基于上述技术目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种耐药型念珠菌的鉴别方法，所述鉴别方法包括采用MKT077孵育待鉴别菌株，并检测孵育前后菌株的荧光强度值。

经本发明验证，MKT077作为一种含硫花青染料类抗癌药物，对Mdr1高表达耐药型念珠菌具有特异亲和性，特别是在白色念珠菌外排泵Mdr1高表达耐药菌株中大量蓄积，而在低表达菌株中含量较少，因此，MKT077可作为特异性鉴别外排泵Mdr1高表达耐药菌株的荧光探针。

本发明还证实了，苯菌灵(Benomyl)能够上调白色念珠菌MFS转运体MDR1基因的表达，在待测的白色念珠菌中加入苯菌灵后，MKT077的荧光强度值相比空白试剂的荧光值发生明显的增强，从荧光检测谱上来看发生了明显的右移；其他类型的念珠菌孵育后，也能够观察到上述现象，但程度比较微弱；在其他菌或哺乳动物细胞中未观察到此现象。基于上述现象，本申请提供的方案中，通过比对单一MKT077孵育或苯菌灵、MKT077共同孵育后的荧光强度值右移程度即可得知待鉴别的菌株是否是念珠菌，通过进一步结合荧光强度值增加的程度，可以判断所述菌株是否为白色念珠菌。明确白色念珠菌后，采用MKT077孵育菌株后，通过对比野生菌株和待测菌株荧光强度的变化，即可确认待测菌株是否为Mdr1耐药型白色念珠菌。

菌株的耐药类型直接影响到治疗用药及治疗方案的调整，本发明提供的鉴别方法只需要不到2个小时即可明确是否为Mdr1耐药型白色念珠菌，可有效缩短临床前等待检验结果的时间，争取更多治疗机会。