[发明专利]一种基于群体感应系统的变异链球菌的检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种基于群体感应系统的变异链球菌的检测方法及其应用，属于涉及基因工程技术领域，该检测方法是基于群体感应系统建立的，所述感应系统的元件包括大肠杆菌的信号肽和组氨酸激酶受体膜蛋白基因复合的基因PelB‑comD、胞内反应调节蛋白基因comE，以及受comE调控激活的启动子nlmC复合绿色荧光信号报告基因sfGFP的基因nlmC‑sfGFP；该检测方法通过所述感应系统对变异链球菌分泌表达的信号分子CSP进行特异性识别响应，进而对变异链球菌进行检测。本发明检测方法能够特异性识别检测变异链球菌，具有操作便捷，检测成本低的特点，该检测方法可应用于龋齿检测中，进而对牙齿健康状况进行评估。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体属于一种基于群体感应系统的变异链球菌检测方法及其应用。

背景技术

变异链球菌(Streptococcus mutans)，是一种生长于口腔的细菌，具有分泌酸性物质腐蚀牙釉质的特点，是口腔主要的致龋齿细菌之一，常常见于牙菌斑中。变异链球菌可通过代谢产生的酸性物质进行腐蚀，进而导致龋齿的发生，其在口腔医学领域被广泛研究。

然而，目前检测变异链球菌的方法比较单一，而且需要昂贵的仪器和高精度的操作相配合，比如目前主要使用于检测变异链球菌的PCR技术，操作起来比较复杂，而且所需使用的设备复杂又昂贵，检测成本比较高。因此，亟需研发出一种不需要使用太多复杂昂贵的仪器设备，操作起来相对简单，检测成本低，并且在普通的培养条件下即可对变异链球菌进行检测的方法。

此外，PCR技术虽然具有检测灵敏度高和特异性高的特点，但这样一来，对检测的错误也有放大作用，容易出现假阳性等不准确的结果，所以，也亟需其他检测技术进行补充，以确保检测结果的准确性。

群体感应系统进行检测是一种相对经济、操作简便的检测方法，然而目前并未被应用于变异链球菌的检测当中，也没有找到适合的群体感应系统元件，而且如何构建依然是个谜团，实施起来也是困难重重。因此，到目前为止，还是没有找到对变异链球菌可以进行补充检测的有效方法。

发明内容

针对背景技术中存在的缺陷和不足，本发明提供了一种基于群体感应系统的变异链球菌的检测方法，该方法能够特异性识别检测变异链球菌，具有操作便捷，检测成本低的特点。

本发明的目的之二是将上述一种基于群体感应系统的变异链球菌的检测方法应用于龋齿检测中，进而可以对牙齿健康状况进行评估。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种基于群体感应系统的变异链球菌的检测方法，该检测方法是基于群体感应系统建立的，所述感应系统的元件包括大肠杆菌的信号肽和组氨酸激酶受体膜蛋白基因复合的基因PelB-comD、胞内反应调节蛋白基因comE，以及受comE调控激活的启动子nlmC复合绿色荧光信号报告基因sfGFP的基因nlmC-sfGFP；

该检测方法通过所述感应系统对变异链球菌分泌表达的信号分子CSP进行特异性识别响应，进而对变异链球菌进行检测。

进一步所采取的措施是：所述感应系统通过所述基因comD、comE和nlmC识别响应所述CSP的浓度变化。

进一步所采取的措施是：所述PelB-comD、comE和nlmC-sfGFP的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5所示。

进一步所采取的措施是：所述PelB-comD的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

进一步所采取的措施是：所述comE的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

进一步所采取的措施是：还包括表达载体的构建，所述感应系统构建于表达载体上。