[发明专利]修饰miR-155-5p/SOCS1轴的外泌体、制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及修饰miR‑155‑5p/SOCS1轴的外泌体制备方法及其在制备治疗视网膜及角膜炎症‑新生血管疾病药物中的应用。该修饰miR‑155‑5p/SOCS1轴的外泌体内包裹有miR‑155‑5p抑制物和高水平SOCS1，通过增强SOCS1表达以及阻断SOCS1的上游miR‑155‑5p的表达，从而强效抑制NFκB通路，在视网膜中可显著抑制小胶质细胞M1型活化并阻断其促进新生血管作用，在角膜中也能够阻断NFκB依赖性信号通路抑制炎症因子的表达而减轻炎症及新生血管的表现。

技术领域

本发明属于细胞生物学、分子生物学及生物医药领域，具体涉及修饰 miR-155-5p/SOCS1轴的外泌体制备方法及其在制备治疗眼部疾病药物中的应用。

背景技术

眼部新生血管的形成是导致多种致盲性眼部疾病的原因，治疗的关键在于抑制新生血管的生长。目前临床上尚没有治疗眼部新生血管真正的有效药物和方法。

眼部新生血管包括视网膜新生血管和角膜新生血管，视网膜新生血管属于异常血管增生，其主要发生在糖尿病视网膜疾病、视网膜中央静脉阻塞、年龄相关性黄斑变性等，是临床病例中致盲的主要原因之一。迄今为止，视网膜新生血管发生的分子机制并不完全清楚，因此深入揭示其发病机制，对视网膜新生血管的早期干预具有重要意义。

小胶质细胞是中枢神经系统特化的巨噬细胞，也是视网膜的第三类胶质细胞。视网膜小胶质细胞的活化被认为是多种眼科疾病的重要驱动力，其对于触发和维持神经炎症起着关键作用。目前，越来越多的研究认为活化的小胶质细胞促进了视网膜新生血管病变。Ma等(Ma Wenxin,Zhao Lian,Fontainhas Aurora M et al.Microglia in the mouseretina alter the structure and function of retinal pigmented epithelialcells:a potential cellular interaction relevant to AMD.[J].PLoS ONE,2009,4:e7945.)通过视网膜色素上皮细胞与小胶质细胞体外共培养实验以及在体视网膜下抑制小胶质细胞实验，证实了小胶质细胞在视网膜色素上皮细胞损伤下发生激活并促进新生血管生成。Ana等(Arroba Ana I,Valverde M,Modulation of microglia in theretina:new insights into diabetic retinopathy.[J].Acta Diabetol,2017,54:527-533.)研究显示，在增生性糖尿病视网膜病变中，小胶质细胞出现异常活化进而促进新生血管产生。Madhvi等 (Menon Madhvi,Mohammadi Shahin,Davila-Velderrain Jose etal.Single-cell transcriptomic atlas of the human retina identifies cell typesassociated with age-related macular degeneration.[J].Nat Commun,2019,10:4902.)通过单细胞测序及生物信息学技术也证实了小胶质细胞的激活是造成视网膜新生血管病变的关键因素。此外，已经存在的视网膜炎症也能够波及静息小胶质细胞进而促进视网膜新生血管的生成。因此，抑制视网膜小胶质的活化对于减缓视网膜炎症进展、抑制视网膜新生血管具有重要意义。

目前治疗视网膜新生血管的主流方式是在玻璃体腔注射下调血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)或其受体的药物和抑制二者结合后发挥生物学效应的药物。同时，也有许多研究已经证实米诺环素可以早期干预视网膜疾病过程，通过阻碍视网膜小胶质细胞活化进而干预新生血管。