[发明专利]一种针对表位点为SSCSSCPLSK的TCR所设计的引物及其应用

说明书

本发明涉及质粒克隆技术领域。本发明提供了一种针对表位点为SSCSSCPLSK的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L11‑3位点的引物对、L11‑6位点的引物对和L11‑15位点的引物对中的一种、两种或三种。本发明的引物对针对分型为HLAA11、表位点为SSCSSCPLSK的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。

技术领域

本发明涉及质粒克隆技术领域，尤其涉及一种针对表位点为SSCSSCPLSK的TCR所设计的引物及其应用。

背景技术

载体是一种运载体(vehicle)，通过其可将多核苷酸序列(例如，外源基因)引入至宿主细胞中，以便转化宿主并促进引入的序列的表达(例如转录和翻译)。载体包括质粒、噬菌体、病毒等。载体的最普遍的类型是质粒，其是指闭合的环状双链DNA环，其中可连接含有目标基因的另外的DNA段。载体的另一种类型为病毒载体，其中将待运输的核酸构建体连接至病毒基因组中。病毒载体可在它们被引入的宿主细胞中自主复制、或可将它们自身整合至宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体可指导与其可操作连接的基因的表达。

要将某一目标基因片段克隆进质粒载体，必须有与目标基因片段序列相匹配的引物。我公司克隆到了3条针对免疫分型为HLA A11的病人体内的EBV病毒蛋白的SSCSSCPLSK表位点的TCR，并对这3条TCR的基因序列申请了专利保护。但是，现有技术中尚没有将此3条TCR的基因序列克隆进质粒载体的引物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种引物对，用于质粒克隆。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案。

本发明提供了一种引物对，所述引物对包括L11-3位点的引物对、L11-6位点的引物对和L11-15位点的引物对中的一种、两种或三种。

作为优选，所述引物对针对分型为HLA A11、表位点为SSCSSCPLSK的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。

作为优选，所述L11-3位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

作为优选，所述L11-6位点的引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

作为优选，所述L11-15位点的引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

本发明还提供了所述的引物对在质粒克隆中的应用。

本发明提供了一种针对表位点为SSCSSCPLSK的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L11-3位点的引物对、L11-6位点的引物对和L11-15位点的引物对中的一种、两种或三种。本发明的引物对针对分型为HLA A11、表位点为SSCSSCPLSK的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。

附图说明

图1为TCRPCR扩增后胶回收电泳结果；

图2为骨架载体质粒图谱；

图3为TCR与载体重组质粒酶切电泳结果；

图4为TCR与载体重组质粒测序峰图；

图5为TCR转染Jurkat细胞，流式检测转染效率；

图6为TCR转染Jurkat细胞后，功能验证流式检测INFg；

图7为TCR转染Jurkat细胞后，功能验证流式检测INFg。

具体实施方式

本发明提供了一种引物对，所述引物对包括L11-3位点的引物对、L11-6位点的引物对和L11-15位点的引物对中的一种、两种或三种。