[发明专利]一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法

说明书

本发明公开了一种有效的真菌菌丝体收集方法，将液体培养液倒入平板中，在其中接入直径为5‑10mm的真菌菌饼，待菌丝长满平板且液体培养液消耗殆尽时，用灭过菌载玻片将菌丝体轻轻从平板上刮下，收集真菌菌丝体。申请人发现，将菌饼接入液体培养液中，静置而不进行振荡，菌丝体会漂浮于培养液表面；且培养液的体积随着培养天数的增加逐渐，直至液体培养液消耗殆尽，可将菌丝与培养液隔离，便于收集得到菌丝体。利用本发明的平板液体培养真菌菌丝体的收集方法，不仅获得的菌丝体含水量低，并且适用范围广，对于较粘稠或较清澈的发酵液都适用，本发明提供的方法操作简单快捷、成本低、节能低碳环保。

技术领域

本发明涉及真菌培养技术领域，具体为一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法。

背景技术

研究人员在进行真菌菌丝体的总DNA、RNA和蛋白质及相关酶的提取及参数探索等研究中，需要对菌丝体进行培养增殖。目前，真菌菌丝收集的方法一般有液体培养的菌丝体收集方法和固体培养的菌丝体收集方法两种，而液体培养的菌丝体收集方法一般采用高速离心法和过滤法两种，固体培养的菌丝体收集方法一般采用试管斜面或平板等固体培养基进行养菌后刮取表面菌丝体的方法，两种方法均可以将菌丝体分离收集。但是其分离方法都存在一定不足。

高速离心法，一方面，由于某些真菌菌种液体培养的菌丝体较为粘稠，成悬浮液大颗粒状态，因此，即使采用很高的离心速度，也难以将菌丝体完全紧凑地沉降到离心管底部，分离效果差；另一方面，菌丝球颗粒内部的水分也难以通过离心去除，并且还存在离心机成本高、操作繁琐耗时等问题。

过滤法，目前包括采用滤纸进行真空抽滤的方法、普通纱布过滤法以及借助收集装置过滤的方法。滤纸真空抽滤法，同样存在由于某些真菌菌种发酵液的浓度高且粘稠，很难得到较干燥的菌丝的问题，另一方面，由于发酵液粘稠，滤纸微孔极易被发酵液堵住，因此，后续难以过滤，必须不断更换滤纸，而且由于滤纸湿润后容易被刮破，因此吸附在滤纸上的菌丝体整取下来需要较高的技术要求。过滤法一般用纱布过滤与过滤装置过滤：纱布法过滤时，由于纱布易沾菌丝，在样品数量多的情况下易造成不同样品间的菌丝交叉污染，不可重复利用，从而造成不必要的浪费，并且在采用纱布过滤时，纱布层数少则菌丝容易漏出，层数多时，每层纱布间及纱布孔中容易残留菌丝，易造成样品的浪费和数据的误差；利用过滤装置过滤，收集菌丝时，收集的菌丝干燥度不够；另一方面，购买过滤装置需要一定的前期投入，增加了成本。

试管斜面或平板等固体培养菌丝体后刮取表面菌丝体的方法，一方面菌丝量太小难以满足实验需求，另一方面，刮取菌丝体过程中难免带入固体培养基，不仅操作麻烦繁琐，而且影响后续分子生物实验的开展及实验结果的准确性。

因此亟需设计一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，以解决上述背景技术中提出因素问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，包括如下结构：

且其生产工艺方法如下：

步骤一：将真菌培养平板通过清水进行清洗至洁净；

步骤二：将清洗后的真菌培养平板排布在真菌培养室内；

步骤三：将真菌菌饼接入盛有少量液体培养液的平板中，静置于适合真菌生长的环境下培养数天；

步骤四：待菌丝体长满培养基，且液体培养基消耗殆尽后收集真菌菌丝体。

优选的，在步骤四制备过程中，待菌丝体长满培养基且液体培养基消耗殆尽后，用载玻片或者手术刀刮下真菌菌丝体并将其收集。

优选的，所述在步骤四制备过程中，培养基为液体培养基。

优选的，所述在步骤三制备过程中，液体培养液是倒置在平板中的。