[发明专利]一种肝细胞三维培养方法

权利要求书

1.一种肝细胞三维培养方法，其特征在于，它包括如下步骤：

步骤一，细胞培养：将肝细胞放入含培养液的培养皿中，将培养皿放入37℃含体积含量为5％CO₂的培养箱中培养，当培养皿中的细胞密度达到80-90％时进行传代，得到用于三维细胞培养的细胞悬浮液；

步骤二，三维细胞培养准备：将步骤一中得到的细胞悬浮液和稀释水凝胶添加至孔板培养皿中进行混合，并调节细胞终浓度为1×10⁵/ml-5×10⁵/ml，在室温下静置至凝固，得到细胞水凝胶混合物，其中稀释水凝胶中水凝胶与水凝胶稀释液按体积比为1:2-1:4；

步骤三，三维细胞培养，向步骤二中的孔板培养皿添加细胞培养液后，放置的培养箱中培养，每天半量更换细胞培养液，培养一段时间后得到三维细胞培养产物。

2.根据权利要求1所述的肝细胞三维培养方法，其特征在于，所述步骤二中细胞浓度为1.1×10⁵/ml。

3.根据权利要求1所述的肝细胞三维培养方法，其特征在于，所述步骤二中水凝胶与水凝胶稀释液体积比为1：3.7。

4.根据权利要求1所述的肝细胞三维培养方法，其特征在于，所述步骤三中培养时间为9.5天。

5.根据权利要求1所述的肝细胞三维培养方法，其特征在于，所述步骤一中培养液为体积百分含量10％胎牛血清的1640培养液。

6.根据权利要求1-5所述的肝细胞三维培养方法，其特征在于，还包括步骤二(1)预测步骤，所述步骤二(1)设置在步骤二与步骤三之间，其包括：根据如下预测模型以需要的细胞活性OD值确定细胞浓度、培养时间和水凝胶与水凝胶稀释液体积比：

Y＝2.11-3.625×10^-3A+0.26B-0.014C-0.075AB-0.047AC+0.050BC-0.042A²-0.36B²-0.037C²，其中：A为细胞浓度，B为培养时间，C为水凝胶与水凝胶稀释液体积比，Y为细胞活性OD值。