[发明专利]一种检测犬IL-6的ELISA试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测犬IL‑6的ELISA试剂盒及其应用。本发明通过IL‑6的引物设计、蛋白诱导和动物免疫，制备出犬IL‑6的单克隆抗体和多克隆抗体，分别将两种抗体作为检测抗体和捕获载体用于ELISA双抗夹心试剂盒中，建立了犬IL‑6的检测试剂盒及其使用方法。本发明所建立的犬IL‑6检测试剂盒可以定量检测样品中IL‑6，兼具灵敏度高和检测范围广的特点，其最低检测值为1.17ng/mL，检测范围为1.17ng/mL～300ng/mL。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，涉及一种检测犬IL-6的ELISA试剂盒及其应用。

背景技术

白介素-6(Interleukin-6，IL-6)，最初被描述为B细胞刺激因子，现在被称为多效性细胞因子，具有多种关键的生物学功能，包括刺激炎症和免疫反应、促进造血和肿瘤发生。它由免疫细胞如单核细胞和巨噬细胞瞬时产生，但也由其他细胞谱系在各种刺激下(如感染或组织损伤)产生。此外，白介素-6作为干细胞扩增和分化的辅助因子与造血相关。

白介素-6的生理特性是复杂的，在免疫系统中具有促炎和抗炎作用。白介素-6在急性炎症状态下调节几种肝脏特异性基因的转录，特别是C-反应蛋白(CRP)，并控制正常浆细胞的存活。此外，白介素-6是T细胞反应的激活剂或抑制剂，这种促炎和抗炎活性的相互作用表明白介素-6可能在调节对疾病的生理反应中起作用。鉴于白介素-6在免疫反应中的作用，在任何针对白介素-6信号传导的治疗策略中，增强易感性都是一个合理的考虑因素，例如白介素-6受体(妥昔单抗、萨里鲁单抗)或白介素-6(斯妥昔单抗)，越来越多地用于治疗类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎。

白介素-6的表达增多与多种疾病过程有关，包括阿尔茨海默病、自身免疫(如类风湿性关节炎)、炎症、心肌梗死、佩吉特病、骨质疏松症、实体瘤、前列腺癌和膀胱癌、某些神经性癌症、B细胞恶性肿瘤。在某些情况下，白介素-6与增殖途径有关，因为它与其他因子一起作用，如肝素结合上皮生长因子和肝细胞生长因子。因此，阻断白介素-6在许多病理情况下可能是有益的。

白介素-6不仅在全身炎症的发病机制中发挥作用，而且在局部炎症的发病机制中起着至关重要的作用，并参与许多类型细胞的生长和分化。在人体内，白介素-6在全层皮肤损伤后迅速产生和释放，甚至在损伤后持续24h。白介素-1β主要由巨噬细胞和单核细胞以及活化成纤维细胞和角质细胞在内的非免疫细胞产生，有助于伤口愈合。在犬体内，白介素-1β通过多种细胞中的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路刺激白介素-6的产生和释放，是犬皮肤伤口愈合的关键过程。

虽然检测IL-6水平不能直接作为判断动物是否患有某种疾病的依据，但动物体内IL-6水平与各种疾病存在着关联，因此建立一种高效的检测方法检测动物体内IL-6水平，用于监测动物健康状况、疾病预后情况、及动物免疫状态，对于犬类意义重大。免疫动物血清或细胞中细胞因子水平是衡量疫苗免疫效果的重要指标之一。因此，建立犬IL-6的检测方法，对于评价疫苗的免疫效果具有重要意义。

目前常用的检测细胞因子的方法有放射免疫分析(RIA)、RT-PCR。放射免疫分析法灵敏度受方法本身工作原理的限制，对体内某些含量特别低的物质尚不能测定，且存在放射线辐射和污染等问题。RT-PCR优点为特异性高，灵敏性高，检测速度快。但由于其灵敏度过高，假阳性结果出现的概率过高，必须同时设置阴性对照。RT-PCR需要多次摸条件，操作要求熟练。

目前市面上虽然有检测犬IL-6的ELISA试剂盒，但具有高灵敏度的试剂盒，其试剂盒的检测范围都比较小；而检测范围比较大的试剂盒，其灵敏度却不高。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种检测犬IL-6的ELISA试剂盒及其应用，本发明通过IL-6的引物设计、蛋白诱导和动物免疫，制备出犬IL-6的单克隆抗体和多克隆抗体，分别作为检测抗体和捕获载体用于ELISA双抗夹心试剂盒中，建立了犬IL-6的检测试剂盒及其使用方法。