[发明专利]一种脐带间充质干细胞冻存液

说明书

本发明涉及一种间充质干细胞冻存液，其包含一种Caspase单克隆抗体，该单克隆抗体具有较好的结合Caspase蛋白的能力。通过在冻存液中添加相应的抗体后，能够有效的提高细胞冻存后的存活率，有利于脐带间充质干细胞的保存及应用，具有较好的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物领域，更具体的涉及一种间充质干细胞冻存液。

背景技术

脐带血中造血干细胞和间充质干细胞含量相对丰富，且其间充质干细胞可在一定条件下在体外诱导分化成为多种组织细胞，利于修复病变或损伤的组织细胞，广泛应用于临床，目前主要应用于血液系统恶性肿瘤、软骨及骨的修复再生、损伤神经的修复，以及肝脏疾病的治疗等。

近年来，脐带血干细胞移植已逐渐成为应用于临床治疗多种恶性和非恶性血液系统疾病的重要手段之一。既往研究认为干细胞白血病SCL基因和急性T淋巴细胞白血病TALl融合基因在造血系统中扮演着重要角色，有学者将SCL以及TALl基因通过病毒转染进入脐带血CD34+干细胞中，实验发现脐带血CD34+干细胞中SCL以及TALl基因以及MEK/ERK磷酸化都对机体造血功能产生影响，且SCL以及TALl基因在其中占主导作用，其可以调节信号通路MEK/ERK磷酸化。同时，因脐带血中同时含有大量间充质干细胞，其可以通过细胞间作用、分泌造血生长因子及细胞因子等作用.促进造血干细胞的增殖及分化。曾有人将间充质干细胞联合脐带血治疗造血干细胞移植失败的血液系统疾病患者.实验结果发现移植联合脐带血的间充质干细胞是一种有效的治疗方法，且其可以减少移植物排斥反应的发生以及减少血液肿瘤的再发生几率。同样，有研究者通过将脐带血间充质干细胞和淋巴细胞联合培养，发现联合培养后淋巴细胞的增殖能力被抑制，尤其是CD8+淋巴细胞亚型.但CD4+T淋巴细胞亚型明显增加，另外脐带血间充质干细胞能够减少Thl和Tcl细胞群，增加Th2和Te2细胞群，所以认为脐带血干细胞在抑制和减少临床移植物抗宿主病方面具有较大的潜力。总的来说，越来越多的临床案例发现同种异体造血干细胞移植存在一定的移植物抗宿主反应等不良反应，近年研究表明利用UCBT可以明显减少上述不良反应.而且其具有来源丰富、免疫原性低以及分化成多种造血细胞的潜力等优点，还可通过释放各种趋化因子、细胞因子、黏附因子促进HSCs归巢，在促进机体造血微环境成熟、加快造血系统重建等方面具有明显促进作用，成为目前血液系统疾病研究的热点之一。

虽然脐带血干细胞具有来源丰富、采集方便、对供者无伤害，不受伦理、法律的限制、分化能力更强、免疫原性更低等诸多有点，使得其在上述疾病的治疗方面表现出了可观的临床前景，但是在临床技术成熟前所面临的问题还有很多。因脐带血中干细胞绝对值偏低，限制了其在临床的应用.所以如何改进培养方法、提高培养成功率特别是冷冻保存的方法是急需解决的问题。

此前的研究表明，随着对低温冻存理论的深人认识，人们发现细胞凋亡参与了细胞冷冻损伤的分子机制，造血干细胞凋亡严重损害其克隆形成能力和移植后的造血重建功能。Caspase家族成员是凋亡级联反应的重要效应蛋白酶，抑制Caspase表达能改善多种细胞冻存后的存活率。使用Caspase抑制剂zVAD-fmk对干细胞进行冻存，发现具有较好的冻存效果。但是目前的研究中，Caspase抑制剂的种类还不够丰富，可供选择的类型还不够多，而且zVAD-fmk本身对于细胞并不是完全没有活性的影响，使得研究Capase抑制剂变得迫在眉睫。

发明内容

本发明克服现有技术缺陷，提供了一种Capase单克隆抗体及其用。

一方面，本发明提供一种Capase单克隆抗体，所述单抗的轻链可变区和重链可变区序列分别如下所示：

轻链可变区(SEQ ID NO：1)

DIVITQSPALMAASPGEKVTITCCPMKSAACICMKWYQQKSGISPKPWIYEYHYDTQGVPARFSGSGSGTSYSLTITSMEAEDAATYYCHYVEVDAGSFGAGTKLELK

重链可变区(SEQ ID NO：2)