[发明专利]一种钯银铜介孔纳米球信号放大的电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种钯银铜介孔纳米球信号放大的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将直径为3.0～5.0mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

(2)将6.0μL、1.0～2.0mg/mL的金纳米粒子/碳化ZIF-L分散液滴加到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；

(3)将6.0μL、5.0～15.0μg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

(4)继续将4μL、0.8～1.2mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

(5)继续滴加6.0μL、10.0fg/mL～100.0ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

(6)继续滴加6.0μL、1.0～3.0mg/mL的钯银铜介孔纳米球/检测抗体Ab₂分散液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干，制得一种钯银铜介孔纳米球信号放大的电化学免疫传感器；

所述金纳米粒子/碳化ZIF-L分散液的制备，包括以下步骤：

(1)金纳米粒子分散液的制备

取0.1～0.3mL、1.0wt％的四水合氯金酸加入到50.0mL的圆底瓶中，加入19.7～19.9mL的超纯水稀释，在磁力搅拌下加热至微沸；将0.2～0.4mL、10.0mg/mL的柠檬酸钠加入至上述溶液搅拌回流15min，冷却后，制得金纳米粒子分散液；

其中10.0mg/mL的柠檬酸钠采用如下步骤配制：称取10.0mg柠檬酸钠加入到1.0mL超纯水中，制得10.0mg/mL的柠檬酸钠溶液备用；

(2)碳化ZIF-L的制备

称取200.0～400.0mg六水合硝酸锌加至小烧杯中，加入20.0mL超纯水，搅拌至完全溶解得溶液A，另取一烧杯加入20.0mL超纯水和600.0～700.0mg甲基咪唑充分溶解后加入到溶液A中，磁力搅拌4h，反应完全后，超纯水离心洗涤三次，然后-60℃真空冷冻干燥12h，得到白色粉末，将白色粉末放入在石英舟内，并将石英舟置于管式炉中，先通氮气30min，随后以5℃/min加热至900℃并恒温3h，冷却到室温后，制得碳化ZIF-L；

(3)金纳米粒子/碳化ZIF-L分散液的制备

称取1.0～3.0mg上述制备的碳化ZIF-L加入到1.0mL超纯水中，超声分散，将1.0～3.0mL金纳米粒子分散液滴加到上述分散介质中，震荡12h，超纯水离心洗涤三次，得下层沉淀，加入1.0mL超纯水，分散均匀，制得金纳米粒子/碳化ZIF-L分散液；

所述钯银铜介孔纳米球/检测抗体Ab₂分散液的制备，步骤如下：

(1)钯银铜介孔纳米球的制备

称取3.0～9.0mg双十八烷基二甲基氯化铵溶解在10.0mL的乙醇/水体积比为2:8共溶剂中，然后加入0.1～0.3mL、100.0mmol/L的氢氧化钠溶液调节pH，随即加入0.48mL、10.0mmol/L的四氯钯酸钠溶液至上述溶液中，搅拌10min后，依次加入0.24mL、10.0mmol/L硝酸银溶液和0.08mL、10.0mmol/L硝酸铜溶液，并保持静置30min；在搅拌状态下将1.0mL、新制备的0.3mol/L抗坏血酸溶液迅速加入上述溶液中，反应30min后，依次用乙酸，乙醇和超纯水分别洗涤，制得钯银铜介孔纳米球；

所用0.3mol/L抗坏血酸溶液的制备方法：称取52.8mg抗坏血酸溶解在1.0mL超纯水中；

(2)钯银铜介孔纳米球/检测抗体Ab₂分散液的制备

取2.0～6.0mg的钯银铜介孔纳米球，加入1.0～2.0mL、20.0～30.0μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab₂分散液，置于4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化6.0～8.0h后，在3000转速下离心5.0～10.0min，得下层沉淀，加入1.0mL、pH＝7.38磷酸盐缓冲溶液离心洗涤三次，取下层沉淀，加入1.0mL、pH＝7.38磷酸盐缓冲溶液，分散均匀，制得钯银铜介孔纳米球/检测抗体Ab₂分散液。