[发明专利]MEK抑制剂在减少CAR-T细胞耗竭和终末分化中的应用

说明书

本发明公开了MEK抑制剂在减少CAR‑T细胞耗竭和终末分化中的应用。优选MEK抑制剂为曲美替尼。本发明还公开了一种CAR‑T细胞体外培养方法，在CAR‑T细胞体外培养的第6天起向培养基中加入MEK抑制剂。本发明经研究发现在CAR‑T细胞培养过程中，加入MEK抑制剂处理，能够减少CAR‑T细胞耗竭和终末分化，从而使CAR‑T细胞体内持久性更好，抗肿瘤作用更强。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及MEK抑制剂在减少CAR-T细胞耗竭和终末分化中的应用。

背景技术

尽管随着医疗技术的进步，白血病患者的长期存活率有明显提升，但难治/复发白血病依旧是当前血液系统恶行肿瘤治疗领域的国际性难题，尤其是成人难治/复发急性淋巴细胞白血病(refractory/relapsed acute lymphocyte leukemia，R/R ALL)，5年生存率仅5％-8％。

靶向CD19的嵌合抗原受体T(CD19-targeted chimeric antigen receptor-modified T cell，CD19 CAR-T)细胞疗法是R/R ALL治疗领域新兴的革命性细胞免疫治疗方法，为R/R ALL的治疗带来了新希望。CAR-T细胞疗法是利用基因工程技术对T细胞进行基因改造后，使其表达能够特异性识别肿瘤抗原的嵌合抗原受体并对肿瘤细胞发动免疫攻击的革命性细胞免疫治疗方法。嵌合抗原受体由胞外可以识别特定肿瘤抗原的单链抗体可变结构域，跨膜结构域和胞内信号传导结构域构成，胞内信号传导结构域一般由CD3ζ和共刺激分子(包括CD28，ICOS，4-1BB，OX4O和CD27等)的信号传导结构域构成。根据所含共刺激信号传导结构域的数量，可将CAR-T划分为一代CAR-T(胞内信号传导结构域仅由CD3ζ构成)，二代CAR-T(胞内信号传导结构域由CD3ζ和一个共刺激分子的信号传导结构域构成)及三代CAR-T(胞内信号传导结构域由CD3ζ和两个共刺激分子的信号传导结构域构成)，当前临床上应用最多的是二代CAR-T，其胞内信号传导结构域通常由CD28或4-1BB共刺激结构域与CD3ζ串联而成。

目前CAR-T细胞疗法已广泛应用于血液肿瘤和实体肿瘤的治疗。其中CD19CAR-T细胞疗法在成人和儿童B细胞来源的R/R ALL中取得了举世瞩目的临床疗效，国际上各单位报道的完全缓解率在60％到93％之间。美国FDA已经批准了4款CD19CAR-T产品用于B细胞来源的难治/复发白血病或淋巴瘤的治疗。

当前国际上所报道的CD19CAR-T治疗后复发率在30％-60％之间。根据复发时白血病细胞表达CD19的情况，复发分为CD19阳性和阴性复发，其中以CD19阳性复发居多，约有46.1％的患者发生CD19阳性复发，10％-20％的患者发生CD19阴性复发。目前研究表明CD19阴性复发主要与肿瘤细胞的CD19发生基因突变，CAR-T的免疫杀伤压力对CD19阴性白血病克隆的自然选择，CAR-T的免疫杀伤压力诱导的B系白血病克隆向髓系白血病克隆的谱系转换，以及CAR-T对CD19的胞啃作用有关。而CD19阳性复发则主要与CAR-T细胞在体内的持久性不足有关。

虽然以CD28为共刺激结构域的CAR-T(28z CAR-T)肿瘤杀伤能力强于以4-1BB为共刺激结构域的CAR-T(4-1BBz CAR-T)，但与其相比却更容易耗竭和终末分化为体内持久性较差的CD62L阴性的效应记忆/效应T细胞。故而接受28z CAR-T治疗的患者更容易发生CD19阳性复发，设法延长28z CAR-T的体内持久性而又不削弱它对肿瘤的强大杀伤能力对于降低CD19阳性复发，改善病人预后显得至关重要。

28z CAR-T体内持久性更差的原因在于：其活化信号传导的强度和速度均高于4-1BBz CAR-T，而这种更快和更强的活化信号传导使其更容易耗竭和终末分化，相比之下，4-1BBz CAR-T活化信号传导的速度和强度较弱，所以不容易耗竭和发生终末分化，在体内能发挥持续抗肿瘤作用。