[发明专利]一种基于悬铃木落叶的改良粘壤土及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种改良粘壤土的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)筛选菌株：收集悬铃木落叶，收集悬铃木落叶上的菌种，涂布培养、纯化，对获得的菌种进行初筛，挑选出纤维素降解能力强的菌株进行生长曲线的测定，取最佳生长状态的菌株后进行纤维素酶活测定的复筛，筛选得到菌株；

(2)制备菌剂：将(1)筛选得到的菌株制成固体菌剂；

(3)制备改良粘壤土：将(2)得到的固体菌剂与粉碎的悬铃木落叶混合进行有氧发酵，有氧发酵完成后得到有机基质，将有机基质与粘壤土混合，制备得到改良粘壤土。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，(1)中所述收集悬铃木落叶上的菌种具体操作为，取收集到的悬铃木落叶加入蒸馏水振荡培养，得到菌株悬浮液。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，(1)中所述涂布培养具体操作为，将菌株悬浮液稀释至适宜浓度，涂布于固体平板培养基，37℃培养36h，所述固体平板培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，(1)中所述纯化为挑选涂布培养得到的菌落在固体平板上用划线法进行纯化；优选的，还包括对纯化得到的菌种进行菌种保藏操作，所属保藏为用无菌牙签挑取单菌落后在固体培养基上划线，待长出菌苔后标好编号后放入4℃冰箱保藏，优选的，所述固体平板培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，(1)中所述初筛为采用刚果红染色法鉴别菌种的纤维素降解能力；所述复筛为挑取生长曲线的测定得到最佳生长状态的菌株接种到液体培养基中，在恒温振荡培养箱中于37℃，200rpm条件下振荡培养36h制得种子液，然后取种子液接种纤维素酶产酶液体培养基中，于37℃，200rpm条件下振荡培养，定时取样测纤维素酶酶活，当纤维素酶酶活最大时筛选得到菌株；

优选的，所述纤维素酶产酶液体培养基成分为羧甲基纤维素钠15g，蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.2g，蒸馏水1000ml，将上述成分加热使其充分溶解后，冷却并调节pH至7.0-7.2。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述(1)还包括对筛选得到的菌株进行菌株形态学和/或分子生物学鉴定，确定菌株种属以及是否致病。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，(2)中所述固体菌剂的制备方法为将(1)得到的菌株与麸皮以体积比1:1.5-1:3混合后进行发酵培养，发酵条件为37℃恒温培养48h，让菌株附着于麸皮上，制成固体菌剂；优选的，将(1)得到的菌株与麸皮以体积比1:1.5混合。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，(3)中所述固体菌剂与粉碎的悬铃木落叶的体积比为1:5-3:5，所述有氧发酵条件为起始温度为自然室温，含水率为60％，并且维持25℃～40℃，15-20天，所述有机基质与粘壤土体积比为1:1～9:10。

9.采用权利要求1～8所述的制备方法制备得到的改良粘壤土。

10.权利要求9所述的改良粘壤土在栽培不结球白菜中的应用，其特征在于，所述改良粘壤土能够提高不结球白菜的生物产量和/或根系活力和/或可溶性糖含量。