[发明专利]一种日香桂快速脱分化相关ofARR基因及其应用

说明书

本发明公开了一种日香桂快速脱分化相关ofARR基因及其应用，属于植物分子生物学及基因工程技术领域。该日香桂快速脱分化相关ofARR基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过克隆得到基因序列的全长，在此基础上构建了超表达载体并进行大花烟草的遗传转化。结果发现，在筛选培养基上生长35d后，外植体可快速出芽，而且出芽率显著高于空白对照组CK，表明ofARR在脱分化方面发挥了重要的调控作用。作为愈伤组织分化不定芽过程中重要转录因子ofARR基因，可以用于基因工程中一些难以脱分化的植物，具有实际应用价值。

技术领域

本发明属于植物分子生物学及基因工程技术领域，具体涉及一种日香桂快速脱分化相关ofARR基因及其应用。

背景技术

日香桂，中国传统的十大名花之一，集绿化、美化、香化于一身。进入新世纪，许多学者对桂花的培养再生体系进行研究，在此过程中发现将不同的外植体，如种胚、嫩叶、茎段、花梗、子叶经过消毒处理后转接到含有一定浓度的生长素和细胞分裂素培养基上都能诱导出愈伤组织并对其进行增殖培养。然而在诱导不定芽的过程中，愈伤组织会难以脱分化并逐渐褐化死亡。离体芽的发生需要外源生长素和细胞分裂素的共同作用。相关研究表明，在细胞分裂素信号转导的过程中，ARR基因起到重要作用，可以使外植体成功诱导出不定芽。

发明内容

鉴于现有技术存在的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题在于提供一种日香桂快速脱分化相关ofARR基因；本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述日香桂快速脱分化相关ofARR基因在构建愈伤组织快速脱分化的转基因植物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种日香桂快速脱分化相关ofARR基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述日香桂快速脱分化相关ofARR基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

含有所述的日香桂快速脱分化相关ofARR基因的载体。

以日香桂快速脱分化相关ofARR基因的cDNA为模板，利用引物进行PCR扩增，并与pBI121载体连接，构建含有所述的日香桂快速脱分化相关ofARR基因的重组超表达载体为pBI121-ofARR。

引物核苷酸序列如下：

Forward Primer：

5’-acgggggactctagaggatccATGGAAGTTGATGGTTCTTCAACA-3’；

Reverse Primer：

5’-ataagggactgaccacccgggGATGACATTATGATGACAGGGGAC-3’。

含有所述的日香桂快速脱分化相关ofARR基因的宿主菌。

所述的日香桂快速脱分化相关ofARR基因在构建愈伤组织快速脱分化的转基因植物中的应用。

进一步的，包括以下步骤：

1)构建含有如SEQ ID NO.1所示的ofARR基因的重组超表达载体；

2)将步骤1)得到的重组超表达载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；

3)用重组农杆菌侵染植物，筛选获得愈伤组织快速脱分化的转基因植物。

本发明中，所用农杆菌为农杆菌GV3101，并用重组农杆菌侵染大花烟草，通过卡那霉素抗性筛选获得愈伤组织快速脱分化的转基因植物。

侵染大花烟草时，所使用的外植体为大花烟草嫩叶，重组农杆菌的OD₆₀₀在0.4-0.45之间，侵染时间为10min。