[发明专利]一种激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极的制备及免疫传感应用

权利要求书

1.一种激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

设计三电极系统微电极图案，采用激光器，在高绝缘PI膜上打印出石墨烯微电极；

于工作电极区域部分滴加贵金属前驱体试剂，激光锚定工作区域，通过激光诱导纳米贵金属颗粒生成，并直接沉积石墨烯表面；

Ag/AgCl浆涂在参比电极上，导电银浆作为信号输出接头，聚二甲基硅氧烷固定工作区域面积，从而形成激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极。

2.根据权利要求1所述的一种激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极的制备方法，其特征在于：所述步骤1）、步骤2）中激光打印或激光诱导的条件为：激光器波长450 nm, 电源电压12 V，激光强度50～100，打印深度5～30，电极工作区域直径4 mm。

3.根据权利要求1所述的一种激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极的制备方法，其特征在于：所述步骤1）、步骤2）激光打印或激光诱导的条件为：激光器波长450 nm, 电源电压12 V，激光强度90，打印深度15。

4.根据权利要求1所述的一种激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极的制备方法，其特征在于：所述步骤2）中贵金属前驱体试剂为氯金酸、氯铂酸、硝酸银水溶液中的一种，质量浓度为1～10%，体积1～10 μL，自然晾干。

5.一种无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）抗体的组装：巯基十一酸溶液滴加到权利要求1所制备的激光直写石墨烯/贵金属纳米颗粒复合电极的工作界面，孵化一段时间，水洗，晾干；接着于工作电极表面滴加1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐/ N-羟基琥珀酰亚胺混合液，室温静置1小时；电极水洗晾干；工作电极表面滴加抗体溶液，孵化，水洗晾干；接着滴加5 μL 1wt％牛血清白蛋白溶液封闭, 室温静置1h，水洗晾干，冷藏，获得组装抗体的复合电极；

2）将样品溶液滴加到步骤1）所制备组装抗体的复合电极的工作区域，吸附一段时间，取出电极，水洗晾干；

3）滴加铁氰化钾溶液，进行循环伏安扫描，监测峰电流的变化，从而构建无标记电化学免疫传感器。

6.根据权利要求5所述的一种无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中巯基十一酸水溶液，浓度1～20 mmol/L，体积1～10 μL，孵化时间为5～60 min；1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺摩尔比为1:1，浓度0. 1～10 mmol/L，体积5 μL，分3次滴加，每次间隔20 min，共计孵化时间60 min；所用抗体与目标抗原匹配，浓度为0.1～1mg/mL。

7.根据权利要求5所述的一种无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述样品为肿瘤标志物中前列腺特异性抗原、糖链抗原15-3 、甲胎蛋白、癌胚抗原的一种，浓度0.01～100 ng/mL，体积5～10 μL，孵化时间为5～60 min。

8.根据权利要求5所述的一种无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：步骤3）中峰电流采用循环伏安法检测，电介质溶液为20 μL 5 mmol/L铁氰化钾含1.0 mol/L氯化钾混合溶液, 扫描范围-0.4～0.4 V，扫速0.1 V/s。

9.一种权利要求5所述方法制备所得的无标记电化学免疫传感器。

10.如权利要求9所述的无标记电化学免疫传感器在检测肿瘤标志物中的应用。