[发明专利]突变型单链人凝血因子VIII在制备融合蛋白中的应用

权利要求书

1.氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的突变型单链人凝血因子VIII在制备人凝血因子VIII的融合蛋白中的应用，其中，所述融合蛋白从N端至C端依次包含B-结构域部分缺失的突变型单链人凝血因子VIII、柔性肽接头、至少1个人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基末端肽刚性单元和延长半衰期部分，其中，延长半衰期部分选自免疫球蛋白Fc段、白蛋白、转铁蛋白或PEG，优选人IgG Fc变体)。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白是糖基化的，优选是通过在哺乳动物细胞(如，中国仓鼠卵巢细胞)中表达而糖基化的。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述柔性肽接头含有2个或多个选自G、S、A和T残基的氨基酸，

优选地，所述柔性肽接头具有以(GS)a(GGS)b(GGGS)c(GGGGS)d循环单元组合形成的氨基酸序列通式，其中a，b，c和d是大于或等于0的整数，且a+b+c+d≥1，

更优选地，所述柔性肽接头优选自下组：

(i)GSGGGSGGGGSGGGGS；

(ii)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(iii)GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(iv)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(v)GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基末端肽刚性单元包含如SEQ ID NO：3所示氨基酸序列或其截短的序列，其中，所述截短的序列包含至少2个糖基化位点，优选地，所述人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基末端肽刚性单元包含以下氨基酸序列：

(i)PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ；

(ii)SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ；

(iii)SSSSKAPPPS；

(iv)SRLPGPSDTPILPQ。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基末端肽刚性单元与权利要求5所述融合蛋白中的羧基末端肽刚性单元氨基酸序列至少具有70％，80％，90％或95％的同一性。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白包含1、2、3、4或5个人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基末端肽刚性单元。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人IgG Fc变体具有降低的ADCC效应和/或CDC效应和/或与FcRn受体的结合亲和力增强，优选地，所述Fc变体选自：

(i)含有Leu234Val、Leu235Ala和Pro331Ser突变的人IgG1绞链区、CH2和CH3区域；

(ii)含有Pro331Ser突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(iii)含有Thr250Gln和Met428Leu突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(iv)含有Pro331Ser、Thr250Gln和Met428Leu突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(v)含有Ser228Pro和Leu235Ala突变的人IgG4绞链区、CH2和CH3区域。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。

9.如权利要求1-8中任一项所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白的活性6000IU/mg。

10.如权利要求1-8中任一项所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白是用于预防或治疗出血性疾病(例如，用于FVIII先天性或获得性缺乏症患者的出血性疾病的预防或治疗、血友病A患者的自发或手术性出血的预防或治疗)的。