[发明专利]一种五氯硝基苯人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用

说明书

本发明提供了一种检测五氯硝基苯的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、五氯硝基苯标准品溶液、五氯硝基苯抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为五氯硝基苯偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的五氯硝基苯抗体，所述五氯硝基苯抗体是由免疫原免疫动物得到的。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测五氯硝基苯的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测南美白对虾样本中五氯硝基苯的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及一种五氯硝基苯人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用技术，具体涉及一种五氯硝基苯人工抗原分子结构以及用于检测五氯硝基苯的酶联免疫试剂盒，可定性、定量检测南美白对虾中五氯硝基苯药物的残留量。

背景技术

五氯硝基苯属有机氯保护性杀菌剂，不溶于水，溶于有机溶剂，化学性质稳定，不易挥发、氧化和分解，也不易受阳光和酸碱的影响，但在高温干燥的条件下会爆炸分解，降低药效。对人、畜、鱼低毒，在土壤残效期长。五氯硝基苯的使用安全性问题已经在世界各国引起了广泛关注。

检测五氯硝基苯的方法有气相色谱法、气相色谱-质谱法等，与上述方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。而免疫化学法检测五氯硝基苯的前提是需要具备针对五氯硝基苯的抗体，本申请发明了五氯硝基苯人工抗原制备方法，并将其应用于酶联免疫试剂盒中，用时短，操作简单，成本较低，适用于基层单位大批量地检测样品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测南美白对虾中五氯硝基苯药物残留量的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。

本发明试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、五氯硝基苯标准品溶液、五氯硝基苯抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为五氯硝基苯偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的五氯硝基苯抗体。

所述五氯硝基苯特异性抗体是以一种五氯硝基苯人工抗原作为免疫原制备获得，所述五氯硝基苯特异性抗体可为五氯硝基苯单克隆抗体或五氯硝基苯多克隆抗体，其中优选五氯硝基苯单克隆抗体。

所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶结合物是由酶和五氯硝基苯抗体偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括五氯硝基苯标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液。

所述五氯硝基苯标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.1μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。

所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

其中在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为pH值为9.6，0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，封闭液为pH值为7.1～7.5，含有1％～3％酪蛋白、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。