[发明专利]一种检测氯羟吡啶的试纸条及方法

说明书

本发明公开了一种检测氯羟吡啶的试纸条及方法。该试纸条包括试纸和微孔试剂，所述试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有氯羟吡啶半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述微孔试剂上冻干有氯羟吡啶单克隆抗体‑胶体金标记物。用本发明试纸条检测氯羟吡啶的方法简便、快速、直观、准确、便于携带、适用范围广、成本低、易推广使用。

技术领域

本发明涉及一种检测氯羟吡啶的试纸条及方法，具体涉及一种用于检测氯羟吡啶的胶体金试纸条，其特别适用于动物源性食品中氯羟吡啶残留的检测。

背景技术

氯羟吡啶(Clopidol)属吡啶类化合物，因其对球虫病具有较强的抑制作用，而在畜禽养殖业中被广泛应用。研究表明，在畜禽养殖过程中贸然停用该类药物，往往会导致球虫病爆发，而连续或过量的用药则会造成氯羟吡啶在动物体内的残留，并会随着食物链进行蓄积和传递。氯羟吡啶具有致畸性，对人类的健康构成了极大的威胁。随着人们对食品安全的日益重视，动物源性食品中药物残留的限量要求也日益严格。我国国家标准GB 31650中规定了食品中氯羟吡啶的最大残留限量。

目前已报道的检测氯羟吡啶的方法主要是气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱质谱法和液相色谱质谱法等仪器方法。这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适于动物源性食品中氯羟吡啶残留的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控，能够更好地满足我国食品监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测动物源性食品中氯羟吡啶残留的胶体金试纸条，并且提供一种高效、准确、简便、适于现场监控和大量样本筛查的检测方法。

本发明所提供的检测氯羟吡啶的试纸条，包括试纸和微孔试剂；所述试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫，其依次连接，所述反应膜上具有包被有氯羟吡啶半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线；所述微孔试剂上冻干有氯羟吡啶单克隆抗体-胶体金标记物，其具有微孔塞。

所述氯羟吡啶单克隆抗体是以氯羟吡啶半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述氯羟吡啶半抗原-载体蛋白偶联物由氯羟吡啶半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝清蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述氯羟吡啶半抗原是由氯羟吡啶与4-马来酰亚胺苯乙酸酰肼反应得到，其分子结构式为：

所述底板为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫为聚酯纤维或玻璃纤维材质；所述吸水垫为吸水滤纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备冻干有氯羟吡啶单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2)制备具有包被有氯羟吡啶半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、底板组装成试纸；

4)将1)和3)制备好的冻干有氯羟吡啶单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1)将氯羟吡啶与4-马来酰亚胺苯乙酸酰肼进行反应，制备氯羟吡啶半抗原；

2)将氯羟吡啶半抗原与载体蛋白偶联，制备氯羟吡啶半抗原-载体蛋白偶联物；

3)用氯羟吡啶半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌氯羟吡啶单克隆抗体的杂交瘤细胞株；