[发明专利]一种多因子细胞因子自动分析方法

说明书

一种多因子细胞因子自动分析方法：提取FCS格式或LMD格式文件中的流式细胞数据；对所有细胞的FSC‑H去除细胞碎片；将有效细胞分为若干个细胞群，将若干个细胞群重新分为两个细胞群；将两个细胞群分为与所检测细胞因子个数相同的若干个细胞群；对每个细胞群内所有细胞抗体APC的荧光强度进行核密度概率密度函数曲线的峰个数检测；对细胞群继续进行分群；将细胞点数少于60的细胞群与周围距离最近的细胞群进行合并；将每个细胞群与所检测的细胞因子进行对应；对每个细胞群内所有细胞的PE抗体的荧光强度进行离群点检测，并去除离群点；计算每个细胞因子的细胞群PE抗体的平均荧光强度。本发明能够有效去除噪音干扰和强度波动获取细胞群的准确荧光强度。

技术领域

本发明涉及一种细胞因子分析方法。特别是涉及一种多因子细胞因子自动分析方法。

背景技术

细胞因子是一种在机体内十分微量，主要是通过相应的细胞受体起作用的，一般分子量低于10kd，多数分布在3kd左右的多肽，通过血液或淋巴液进行传递，通过自分泌、内分泌或旁分泌进行细胞之间的通讯和信号交流。细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子的检测不仅是基础免疫研究的有效手段，同时在临床疾病诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测方面具有重要价值。

细胞因子流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景。目前多因子细胞因子的分析需要通过在2维散点图上面将不同标记的微球群区分开来,传统方法通过固定范围或者人工手动圈群的方法实现。

传统的细胞因子流式分析法存在的以下问题：

1、每个数据内二维散点图的分布不尽相同，所以按照固定范围圈选细胞会在一定程度上影响细胞分类的效果；

2、人工圈选则会因为操作人员的主管因素影响细胞分类结果，同时也会需要人工成本。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种可以在节约人力成本的同时节约时间成本，能够自动获取细胞群的准确荧光强度的多因子细胞因子自动分析方法。

本发明所采用的技术方案是：一种多因子细胞因子自动分析方法，包括如下步骤：

1)提取FCS格式或LMD格式文件中的流式细胞数据；流式细胞数据包含：每个流式细胞前向角散射光FSC数据、侧向散射光SSC数据及若干抗体对应的荧光强度值；

2)对所有细胞的FSC-H采用核密度估计方法，去除细胞碎片；

3)对去除细胞碎片后流式细胞的FSC-H、SSC-H及抗体APC的荧光强度值，采用聚类的方法，将有效细胞分为若干个细胞群，将各个细胞群FSC-H的平均值与分群阈值进行比较，将若干个细胞群重新分为两个细胞群；

4)分别对两个细胞群内所有细胞抗体APC的荧光强度采用高斯混合模型的聚类算法，将两个细胞群分为与所检测细胞因子个数相同的若干个细胞群；

5)利用核密度概率密度函数计算公式对每个细胞群内所有细胞抗体APC的荧光强度进行计算核密度概率密度函数，对核密度概率密度函数曲线的峰个数进行检测，如果峰的个数大于1，则进入步骤6)，否则进入步骤7)；

6)对细胞群FSC-H采用核密度概率密度函数计算公式计算核密度概率密度函数，并根据核密度概率密度函数的波峰和波谷对细胞群继续进行分群；

7)检测所有细胞群内细胞点数，将细胞点数少于60的细胞群与周围距离最近的细胞群进行合并；

8)根据每个细胞群抗体APC的平均荧光强度，将每个细胞群与所检测的细胞因子进行对应；

9)采用高斯混合模型对每个细胞群内所有细胞的PE抗体的荧光强度进行离群点检测，并去除离群点；