[发明专利]一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物及其制备方法

权利要求书

1.一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将β-环糊精、四氟对苯二腈、碳酸盐加入混合溶剂中得到混合溶液Ⅰ，然后将纳米四氧化三铁加入混合溶液Ⅰ中，于80～100℃反应24～48h，外加磁场将纳米四氧化铁磁性分离后，用浓盐酸冲洗至无气泡产生得到无机-有机磁性纳米复合固定化材料；

所述β-环糊精、四氟对苯二腈和碳酸盐之间的质量比为1∶(0.5～1)∶(1～2)；混合溶剂为四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺之间按体积比为(7～9)∶1配制而成，所述纳米四氧化三铁与β-环糊精的质量比为1∶(6～10)；

(2)将偶氮苯-4-苯甲酸、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)和N-羟基琥珀酰亚胺加入到有机溶剂中配制成0.25g/ml的有机溶液，于室温下搅拌2～5h，反应结束后加入5mg/mL含有酶催化剂的PBS溶液，于4～10℃下搅拌10～30min得到混合溶液Ⅱ；将无机-有机磁性纳米复合固定化材料加入混合溶液Ⅱ中，恒温10～25℃摇床培养2～4h，外加磁场磁性分离后得到酶固定化复合物；

所述有机溶液与PBS溶液的体积比为1：(200～500)，所述偶氮苯-4-苯甲酸、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、N-羟基琥珀酰亚胺之间的质量比为1∶(0.5～1)∶(0.1～1)，所述酶催化剂和无机-有机磁性纳米复合固定化材料的质量比为1∶(2～5)。

2.根据权利要求1所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中β-环糊精、四氟对苯二腈和碳酸盐之间的质量比为1∶0.5∶1.5；所述纳米四氧化三铁与β-环糊精的质量比为1∶8。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中于80℃反应48h。

4.根据权利要求1或2所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中碳酸盐为碳酸钾或碳酸钠。

5.根据权利要求1或2所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述偶氮苯-4-苯甲酸、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、N-羟基琥珀酰亚胺之间的质量比为1∶0.6∶0.4。

6.根据权利要求1或2所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中酶催化剂和无机-有机磁性纳米复合固定化材料的质量比为1∶2。

7.根据权利要求1或2所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜；酶催化剂为酪氨酸酶或漆酶。

8.如权利要求1至7中任一项所述的一种基于光致可重复使用固定化材料的酶固定化复合物的制备方法所制备得到的酶固定化复合物。