[发明专利]一种检测展青霉素的SERS探针及其制备方法和应用在审
申请号: | 202110472009.2 | 申请日: | 2021-04-29 |
公开(公告)号: | CN113125411A | 公开(公告)日: | 2021-07-16 |
发明(设计)人: | 郭志明;王明明;高凌波;尹丽梅;陈全胜;邹小波;蔡健荣 | 申请(专利权)人: | 江苏大学 |
主分类号: | G01N21/65 | 分类号: | G01N21/65 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 212013 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 青霉素 sers 探针 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种检测展青霉素的SERS探针的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1.制备表面增强拉曼材料金银核壳纳米棒AuNRs@4-MBA@Ag:
将4-MBA修饰的AuNRs(AuNRs@4-MBA)溶液加入到CTAB溶液中,混合均匀后,加入Vc水溶液、NaOH水溶液和AgNO3水溶液,摇匀静置反应;合成金银核壳纳米棒,记为AuNRs@4-MBA@Ag;
S2.制备信号分子材料:
取AuNRs@4-MBA@Ag溶液于容器中,加入活化好的cDNA水溶液,室温孵育,得到cDNA修饰的AuNRs@4-MBA@Ag信号分子材料,记为AuNRs@4-MBA@Ag@cDNA;
S3.乙酸钠还原氯化铁FeCl3合成羧基化磁性纳米粒子:
取三氯化铁加入乙二醇溶液中,待完全溶解后,加入乙酸钠和壳聚糖,反应结束后,将溶液转移至反应釜中,置于烘箱中反应后,磁吸附水洗,干燥成粉末状,得到羧基化磁性纳米粒子;
S4.制备磁性捕捉分子材料:
采用EDC和NHS活化步骤S3中制备的羧基化磁性纳米粒子表面的羧基,将PAT适配体溶液与活化后的羧基化磁性纳米粒子混合,孵育,形成磁性捕捉分子,记为Fe3O4@DNA;
其中,所述PAT适配体序列为:
GGCCCGCCAACCCGCATCATCTACACTGATATTTTACCTT,在3’端修饰氨基;
S5.制备SERS探针:
将制备的信号分子材料AuNRs@4-MBA@Ag@cDNA与磁性捕捉分子Fe3O4@DNA混合反应,反应完成后,去除上清液,将沉淀重新悬浮到水溶液中。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述AuNRs@4-MBA溶液的加入量为3mL~5mL;CTAB溶液的浓度0.04mM,加入量为4mL;Vc水溶液的浓度为0.1M,加入量为150μL;AgNO3水溶液的浓度为10mM,加入量为20~120μL。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S2中所述活化cDNA的方法为:取水加入装有cDNA的离心管中,配制cDNA溶液;取三(2-羧乙基)膦(TCEP)水溶液与cDNA溶液混合孵育,二者体积比为1:1,孵育时间为1h,得到活化的cDNA溶液;所述AuNRs@4-MBA@Ag溶液与活化好的cDNA水溶液的体积比为20:1-3;所述孵育时间8~12h。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述三氯化铁与乙二醇溶液的用量比为0.5g~1g:40~80mL;所述乙酸钠的用量为3g~6g;所述壳聚糖用量为0.5g;所述反应在搅拌条件下进行,搅拌时间20min;所述烘箱中反应温度为200℃~220℃,反应时间为6h~12h。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S4中所述EDC和NHS活化磁性纳米粒子过程中,磁性纳米粒子、EDC、NHS的用量比为5mg~15mg:0.4g~1g:1g~1.5g,活化时间为30min~60min。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S4中所述PAT适配体溶液为500μL水加入装有2OD PAT适配体;所述活化后的磁性纳米粒子溶液与PAT适配体溶液混合反应过程中,PAT适配体溶液的加入量为100μL~300μL,孵育温度为30℃~40℃,孵育时间为2h~6h。
7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S5中所述AuNRs@4-MBA@Ag@cDNA信号分子与Fe3O4@DNA捕捉分子的体积比为1:1~3:1,反应时间为1h~2h。
8.权利要求1-9任一项所述方法制备的检测展青霉素的SERS探针,所述探针采用展青霉素适配体作为识别分子,能特异性识别靶分子展青霉素。
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