[发明专利]一种三叶木通的离体培养方法

说明书

本发明属于细胞培养技术领域，涉及一种三叶木通的体外培养方法。以三叶木通新采收成熟种子中的合子胚为外植体，将其置于愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织和增殖、进而诱导胚性愈伤组织、体细胞胚胎的分化、植株再生。本发明方法培育周期在140天左右、再生植株成活率达到85%以上。本发明为三叶木通的高效离体再生体系和遗传改良提供了切实可行的技术体系。

技术领域

本发明涉及植物的离体培养技术领域，具体涉及一种三叶木通的离体培养方法。

背景技术

三叶木通（Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz）是木通科木通属，半落叶木质藤本果树，其果实除鲜食外，可用于酿酒、果汁、果脯、果冻和茶等食品加工，是一种应用非常广泛的新型水果。全株可入药，具有补虚、止咳、清热利尿、通经活络、镇痛、排脓、通乳等功效。此外，三叶木通果实、种子、叶片中含有蛋白质黄酮类、油脂、氨基酸、多糖、维生素、甾类和木质素类等多种成分，具有抗氧化功能，能够提高人体免疫力、延缓衰老、抗炎防癌，具有很高的保健价值，可作为药食同源植物进行深度开发。三叶木通枝条纤细，攀援能力强，生长速度快，紫花垂吊，花形奇特，具有很好的观赏价值。此外，三叶木通这一物种具有较强的生态适应性。可见，三叶木通食用、药用、观赏和生态等方面具有较高的价值，开发潜力巨大。

随着市场需求量增加，过度采摘野生水果资源使得三叶木通优良种源供不应求。此外，三叶木通果皮较厚，果实中种子占比居多，可食率低，自然状态下发芽率也偏低，迫切需要开展少籽或无籽新品种的培育。因此，建立高效稳定的三叶木通体细胞胚胎发生技术体系，可为优良种苗的快速繁育和种质遗传改良研究提供切实可行的技术平台。本体系的建立也能够有效地促进三叶木通的开发利用，保护自然资源的同时，进一步推动三叶木通产业的健康可持续发展。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种三叶木通的离体培养方法，其方法的培育周期在140天左右、再生植株成活率达到85%以上。

本发明提供所采用的技术方案是：

一种三叶木通的离体培养方法，包括以下步骤：

1）愈伤组织的诱导：以三叶木通种子中的合子胚为外植体，将其置于诱导培养基上诱导愈伤组织，得到诱导后的初代愈伤组织；

2）胚性愈伤组织的诱导：将步骤1）诱导后的初代愈伤组织置于胚性诱导培养基中培养，得到胚性愈伤组织；

3）体细胞胚胎的分化和增殖诱导：将步骤2）获得的胚性愈伤组织置于分化培养基上诱导体胚分化并继代增殖；

4）植株再生：将经步骤3）分化出的体细胞胚置于再生培养基上诱导萌发，获得三叶木通完整植株。

优选地，所述步骤1）中，诱导培养基是在MS基本培养基中添加了1.0 -4.0 mg/L2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D），0.1-1.0 mg/Lα-萘乙酸（NAA）。

进一步优选地，所述步骤1）中，愈伤组织诱导培养基中 2, 4-D 浓度为2.0 mg/L，NAA浓度为 0.2 mg/L。

优选地，所述步骤2）胚性诱导培养基是在MS基本培养基中添加0.01-0.5 mg/LNAA。

进一步优选地，所述步骤2）胚性愈伤诱导培养基中NAA浓度为 0.2 mg/L。

优选地，所述步骤3）所述分化培养基是在MS基本培养基中添加了6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）（0.1-0.6 mg/L）和 NAA（0.05-0.2 mg/L）。

进一步优选地，所述步骤3）体胚分化培养基中NAA浓度为0.1 mg/L，6-BA浓度为0.2 mg/L；次生胚增殖培养基NAA 浓度为0.05 mg/L，6-BA 浓度为0.1 mg/L。