[发明专利]来源于补体成分C5a的抗菌肽及其应用

说明书

本发明公开了来源于补体成分C5a的抗菌肽及其应用，属于抗菌制剂技术领域，所述抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1‑8任一所示。本发明分三段分别合成了几种代表性脊椎动物的补体成分C5a从N端到C端，长度约29‑35个氨基酸的重叠肽，并利用琼脂扩散法进行筛选，根据抑菌圈的有无和直径大小，从中共筛选得到了8个具有抗菌活性的抗菌肽，其对于大肠杆菌和/或鲶爱德华氏菌具有高抗菌活性，可用于制备抗菌剂或抗菌药物，具有广泛的应用前景，并且这几个抗菌肽还具有分子量小、合成简单的特点，具有较好的应用价值。

技术领域

本发明属于抗菌制剂技术领域，具体涉及来源于补体成分C5a的抗菌肽及其应用。

背景技术

近年来，由于传统抗生素的大量使用，病原菌的耐药性越发凸显，这对人类及养殖动物的健康造成了很大的威胁。因此，科研人员正迫切致力于研发新型的抗菌药物。

抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)是生物在长期进化过程中为适应环境而最早产生的免疫活性分子，是天然免疫的重要介质，在宿主对抗病原入侵的免疫防御中起着极其重要的作用。抗菌肽以其热稳定性、不易产生耐药性、效果稳定等特点，被认为是抗生素的最佳替代品之一，对病害防控有着广阔的应用前景。补体系统是脊椎动物免疫系统的重要组成部分，其活化会产生同源小分子C3a、C4a和C5a。研究表明，来源于人体的C3a和C4a具有抗菌肽活性，但C5a不具有此活性，而其他脊椎动物的补体成分C5a是否具备抗菌活性，能否被开发为抗菌肽尚待研究。

发明内容

本发明的目的在于提供来源于补体成分C5a的抗菌肽及其应用。本发明分三段分别从N端到C端合成了几种代表性脊椎动物的C5a的重叠肽(长度约29-35个氨基酸)，并利用琼脂扩散法进行筛选，根据抑菌圈的有无和直径大小，从代表脊椎动物的补体成分C5a中筛选得到了8个具有抗菌活性的抗菌肽，部分抗菌肽对于大肠杆菌和鲶爱德华氏菌具有高抗菌活性，可用于制备抗菌剂，并且具有分子量小、合成简单的特点，具有较好的应用价值。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

本发明提供了来源于补体成分C5a的抗菌肽，所述抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1-8任一所示。

进一步地，如序列表SEQ ID NO.1-8所述的氨基酸序列为脊椎动物补体成分C5a从N端到C端的重叠肽。

本发明还提供了上述来源于补体成分C5a的抗菌肽在抗菌中的应用。

进一步地，如序列表SEQ ID NO.1-8任一所示的来源于补体成分C5a的抗菌肽在用于抗大肠杆菌中的应用。

进一步地，如序列表SEQ ID NO.1-5、SEQ ID NO.7-8任一所示的来源于补体成分C5a的抗菌肽在用于抗鲶爱德华氏菌中的应用。

进一步地，采用琼脂扩散法筛选具有抗菌活性的抗菌肽。

进一步地，所述琼脂扩散法包括：

S1、菌种活化：取冷冻保存的菌株，平板划线接种培养后，挑选单个菌落接种至液体培养基中，培养至对数期，收集菌体，配制菌液；

S2、抑菌琼脂平板的制备：向含琼脂的灭菌培养基中加入步骤S1的菌液，混匀后倒入平板中，固化后使用灭菌打孔器打孔，于孔内分别加入如序列表SEQ ID NO.1-8所示的抗菌肽，孵育使多肽扩散；

S3、抑菌直径的测量：将步骤S2制备的抑菌琼脂平板培养后测定抑菌圈的直径，以抑菌圈的直径判断抗菌活性的高低。

进一步地，所述步骤S2中孔内加入的抗菌肽的浓度为125μM。

本发明还提供了上述来源于补体成分C5a的抗菌肽在制备抗菌剂或抗菌药物中的应用。