[发明专利]miR-29a-3p inhibitor体外诱导人体mBreg细胞的用途及方法

说明书

本发明提出一种miR‑29a‑3p inhibitor在体外诱导人体mBreg细胞的用途及方法，采用miR‑29a‑3p inhibitor在体外诱导人体mBreg细胞，进一步的，miR‑29a‑3p inhibitor诱导CD19⁺B细胞向mBreg细胞转化，mBreg细胞为CD19⁺CD24^hiCD27⁺Breg细胞亚群；本发明利用miR‑29a‑3p inhibitor体外诱导人体mBreg细胞的方法，纯度高、细胞活性损伤小，转化效率高，细胞活性高，来源广，污染可能性小，能够弥补目前mBreg基础和临床研究上数量不足的缺陷。

技术领域

本发明涉及分离纯化和诱导细胞领域，具体的说是人miR-29a-3p inhibitor在体外诱导人体mBreg细胞的用途以及分离和诱导mBreg细胞的方法。

背景技术

目前在动物模型和临床患者中均证实Breg在移植急、慢性排斥的发生中均起到重要作用，检测Breg不但可以预测术后患者发生急、慢性排斥的风险，动物实验中还发现过继性输注Breg可以缓解排斥反应。mBreg细胞可以通过分泌IL‐10和涉及CTLA-4的细胞间接触来抑制T细胞的增殖和抑制作用，从而提供保护，维持机体免疫平衡。但是Breg因为在人体内数量极少，在体外存活时间较短，且无法有效由普通B细胞诱导，目前实验多局限于动物模型，目前的Breg过继回输实验也存在很大的局限性。因此要对Breg细胞的进一步深入的研究，首先要建立一种高效的细胞分离和诱导方法。

Breg的主要特征是产生并分泌白细胞介素IL-10和(或)转化生长因子TGF-β等细胞因子，从而起到抑制炎症反应的负向调节作用，但是目前还没有公认的Breg细胞的表型，其中CD19⁺CD24^hiCD27⁺是目前研究最为广泛的Breg，且这群细胞在肝移植患者发生慢性排斥时显著降低，可以用来预测肝移植术后急性排斥的发生。目前世界上诱导Breg的方式主要通过BAFF（B-cell activating factor）对普通B细胞进行诱导，而该技术诱导纯度仅10~30%左右，得到的量较少，无法满足进一步科研和临床研究的需要。

MicroRNA是一类小的非编码RNA, 通过与靶基因的3’-非翻译区通过碱基对的互补结合抑制其翻译或降解其mRNA从而下调靶蛋白的表达水平。MicroRNA 通过影响靶基因的表达而调控许多生理和疾病过程。目前已有研究证实MicroRNA在免疫细胞的生长分化中起到关键作用，并进一步参与到肝移植术后急性排斥的发生中。我们希望通过调控B细胞中的miR-29a-3p的表达促进B细胞向CD19⁺CD24^hiCD27⁺ Breg细胞分化从而达到临床研究和治疗的需要。

细胞治疗是目前有望在自身免疫性疾病，器官排斥等领域取得一定疗效的治疗方法，最近Breg的过继性输注成为细胞治疗的新分支，但是一直限制Breg细胞临床应用的主要问题是Breg细胞来源比较少，目前的体外诱导效率低并且其活性也低。

发明内容

为了解决Breg细胞来源少，体外诱导效率低并且其活性也低的技术问题，本发明提出一种miR-29a-3p inhibitor在体外诱导人体Breg细胞的用途。miR-29a-3p通过结合于NFAT5靶基因的3’UTR区域促进NFAT5蛋白的降解，NFAT5信号通路是体内免疫细胞的重要通路，在免疫稳态中起着重要作用，发明人在试验中偶然发现可以利用miR-29a-3pinhibitor诱导普通B细胞向mBreg细胞转化，从而为基础和临床人体mBreg相关研究提供新的方法。

由此，申请人提出了一种miR-29a-3p inhibitor在体外诱导人体mBreg细胞的用途，以及利用miR-29a-3p inhibitor体外诱导人体mBreg细胞的方法。